中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2007年
1期
120-123
,共4页
康鲁东%吴伟芳%崔福爱%王秀利%胡晓燕%孔峰
康魯東%吳偉芳%崔福愛%王秀利%鬍曉燕%孔峰
강로동%오위방%최복애%왕수리%호효연%공봉
前列腺肿瘤%前列腺特异抗原
前列腺腫瘤%前列腺特異抗原
전렬선종류%전렬선특이항원
目的:构建前列腺特异性表达的人前列腺特异膜抗原(PSMA)基因启动子/增强子表达载体,并进行组织特异性鉴定.方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增PSMA上游1 175 bp的启动子序列,及第三内含子中258 bp的增强子序列,将两个序列定向克隆至荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-Basic,构建前列腺特异性表达载体pGL3-PSMP-PSME.将构建载体用脂质体分别转染前列腺癌PC-3M细胞株及4种非前列腺癌细胞株,48 h后通过检测荧光素酶表达活性,确定克隆的启动子及增强子的活性及其组织特异性表达活性.结果:构建的pGL3-PSMP-PSME质粒经酶切及DNA测序分析鉴定,证实克隆片段的大小、插入方向及其序列正确.细胞转染结果显示,pGL3-PSMP-PSME在PC-3M细胞株中表达活性明显高于其它4种非前列腺癌细胞株.结论:构建的前列腺表达载体具有较高的组织特异性,为进一步研究PSMA调控序列驱动治疗基因进行前列腺癌的靶向生物治疗奠定了基础.
目的:構建前列腺特異性錶達的人前列腺特異膜抗原(PSMA)基因啟動子/增彊子錶達載體,併進行組織特異性鑒定.方法:從人外週血中提取基因組DNA,採用PCR技術分彆擴增PSMA上遊1 175 bp的啟動子序列,及第三內含子中258 bp的增彊子序列,將兩箇序列定嚮剋隆至熒光素酶報告基因錶達質粒pGL3-Basic,構建前列腺特異性錶達載體pGL3-PSMP-PSME.將構建載體用脂質體分彆轉染前列腺癌PC-3M細胞株及4種非前列腺癌細胞株,48 h後通過檢測熒光素酶錶達活性,確定剋隆的啟動子及增彊子的活性及其組織特異性錶達活性.結果:構建的pGL3-PSMP-PSME質粒經酶切及DNA測序分析鑒定,證實剋隆片段的大小、插入方嚮及其序列正確.細胞轉染結果顯示,pGL3-PSMP-PSME在PC-3M細胞株中錶達活性明顯高于其它4種非前列腺癌細胞株.結論:構建的前列腺錶達載體具有較高的組織特異性,為進一步研究PSMA調控序列驅動治療基因進行前列腺癌的靶嚮生物治療奠定瞭基礎.
목적:구건전렬선특이성표체적인전렬선특이막항원(PSMA)기인계동자/증강자표체재체,병진행조직특이성감정.방법:종인외주혈중제취기인조DNA,채용PCR기술분별확증PSMA상유1 175 bp적계동자서렬,급제삼내함자중258 bp적증강자서렬,장량개서렬정향극륭지형광소매보고기인표체질립pGL3-Basic,구건전렬선특이성표체재체pGL3-PSMP-PSME.장구건재체용지질체분별전염전렬선암PC-3M세포주급4충비전렬선암세포주,48 h후통과검측형광소매표체활성,학정극륭적계동자급증강자적활성급기조직특이성표체활성.결과:구건적pGL3-PSMP-PSME질립경매절급DNA측서분석감정,증실극륭편단적대소、삽입방향급기서렬정학.세포전염결과현시,pGL3-PSMP-PSME재PC-3M세포주중표체활성명현고우기타4충비전렬선암세포주.결론:구건적전렬선표체재체구유교고적조직특이성,위진일보연구PSMA조공서렬구동치료기인진행전렬선암적파향생물치료전정료기출.
