中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2007年
4期
464-468
,共5页
林彦星%孙彦伟%刘镇明%戚一达%耿忠海
林彥星%孫彥偉%劉鎮明%慼一達%耿忠海
림언성%손언위%류진명%척일체%경충해
PCV2%ORF2截短基因%克隆%表达
PCV2%ORF2截短基因%剋隆%錶達
PCV2%ORF2절단기인%극륭%표체
参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine cireovirus type 2,PCV2)的ORF2基因序列,设计合成1对引物,对PCV-2 ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段(ORF2-ME)进行PCR扩增,并克隆到pMD 18-T Simple Vector中,进行序列测定.将重组质粒pMD-ORF2-ME的EcoR V和Xhol I双酶切产物插入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-ORF-ME.测序分析表明,克隆的ORF2-ME与GenBank上公布的PCV2毒株核苷酸序列同源性为99%~100%,推导的氨基酸序列同源性介于91%~100%之间.原核表达栽体导入BL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western Blotting分析,结果表明ORF2-ME在BL21(DE3)中成功表达,所表达融合蛋白的相对分子质量约为40000,并能被PCV2阳性血清所识别,这就为PCV2感染诊断和抗体检测提供了依据.
參照GenBank中豬圓環病毒Ⅱ型(Porcine cireovirus type 2,PCV2)的ORF2基因序列,設計閤成1對引物,對PCV-2 ZS株ORF2基因上含主要抗原位點的片段(ORF2-ME)進行PCR擴增,併剋隆到pMD 18-T Simple Vector中,進行序列測定.將重組質粒pMD-ORF2-ME的EcoR V和Xhol I雙酶切產物插入原覈錶達載體pET-32a(+),構建原覈錶達載體pET-ORF-ME.測序分析錶明,剋隆的ORF2-ME與GenBank上公佈的PCV2毒株覈苷痠序列同源性為99%~100%,推導的氨基痠序列同源性介于91%~100%之間.原覈錶達栽體導入BL21(DE3)後用IPTG進行誘導錶達,收集菌液進行SDS-PAGE和Western Blotting分析,結果錶明ORF2-ME在BL21(DE3)中成功錶達,所錶達融閤蛋白的相對分子質量約為40000,併能被PCV2暘性血清所識彆,這就為PCV2感染診斷和抗體檢測提供瞭依據.
삼조GenBank중저원배병독Ⅱ형(Porcine cireovirus type 2,PCV2)적ORF2기인서렬,설계합성1대인물,대PCV-2 ZS주ORF2기인상함주요항원위점적편단(ORF2-ME)진행PCR확증,병극륭도pMD 18-T Simple Vector중,진행서렬측정.장중조질립pMD-ORF2-ME적EcoR V화Xhol I쌍매절산물삽입원핵표체재체pET-32a(+),구건원핵표체재체pET-ORF-ME.측서분석표명,극륭적ORF2-ME여GenBank상공포적PCV2독주핵감산서렬동원성위99%~100%,추도적안기산서렬동원성개우91%~100%지간.원핵표체재체도입BL21(DE3)후용IPTG진행유도표체,수집균액진행SDS-PAGE화Western Blotting분석,결과표명ORF2-ME재BL21(DE3)중성공표체,소표체융합단백적상대분자질량약위40000,병능피PCV2양성혈청소식별,저취위PCV2감염진단화항체검측제공료의거.