第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2008年
4期
361-365
,共5页
陶崑%王东%曾建明%黄世峰%陈新敏%曹唯希%黄宗干%冯文莉
陶崑%王東%曾建明%黃世峰%陳新敏%曹唯希%黃宗榦%馮文莉
도곤%왕동%증건명%황세봉%진신민%조유희%황종간%풍문리
bcr/abl融合基因%糖基磷脂酰肌醇类%白细胞介素-12%真核双表达
bcr/abl融閤基因%糖基燐脂酰肌醇類%白細胞介素-12%真覈雙錶達
bcr/abl융합기인%당기린지선기순류%백세포개소-12%진핵쌍표체
目的:构建由糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定修饰的bcr/abl和鼠IL-12(mIL-12)真核双表达质粒,在COS-7细胞中检测其基因和膜蛋白表达.方法:以含有慢粒白血病(b3a2型)migP210全长序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得654 bp的bcr/abl融合基因片段,酶切后插入pBudCE4.1空载中,经鉴定获得重组质粒pBB.同时,RT-PCR扩增人外周血淋巴细胞CD24分子中的GPI锚定序列,酶切后克隆入pBB质粒中与bcr/abl基因片断羧基端相连,获得重组质粒pBBG并鉴定.然后扩增mIL-12基因片段并亚克隆入pBBG另一多克隆位点,构建重组质粒pBBGI.在多聚阳离子介导下将pBBGI质粒转染COS-7细胞,采用RT-PCR, Western Blot检测bcr/abl融合基因及其蛋白的表达,ELISA检测mIL-12的表达.结果:经酶切和测序鉴定证实,由GPI锚定连接的bcr/abl及mIL-12基因插入片段正确;转染细胞中有bcr/abl融合基因、转染细胞膜上有bcr/abl融合蛋白的表达,细胞培养上清中也有mIL-12的表达.结论:成功构建能在真核细胞中表达bcr/abl和mIL-12的重组质粒PBBGI,为进一步研究bcr/abl基因疫苗诱导肿瘤特异性细胞免疫奠定了基础.
目的:構建由糖基化燐脂酰肌醇(GPI)錨定脩飾的bcr/abl和鼠IL-12(mIL-12)真覈雙錶達質粒,在COS-7細胞中檢測其基因和膜蛋白錶達.方法:以含有慢粒白血病(b3a2型)migP210全長序列的質粒為模闆,通過PCR擴增穫得654 bp的bcr/abl融閤基因片段,酶切後插入pBudCE4.1空載中,經鑒定穫得重組質粒pBB.同時,RT-PCR擴增人外週血淋巴細胞CD24分子中的GPI錨定序列,酶切後剋隆入pBB質粒中與bcr/abl基因片斷羧基耑相連,穫得重組質粒pBBG併鑒定.然後擴增mIL-12基因片段併亞剋隆入pBBG另一多剋隆位點,構建重組質粒pBBGI.在多聚暘離子介導下將pBBGI質粒轉染COS-7細胞,採用RT-PCR, Western Blot檢測bcr/abl融閤基因及其蛋白的錶達,ELISA檢測mIL-12的錶達.結果:經酶切和測序鑒定證實,由GPI錨定連接的bcr/abl及mIL-12基因插入片段正確;轉染細胞中有bcr/abl融閤基因、轉染細胞膜上有bcr/abl融閤蛋白的錶達,細胞培養上清中也有mIL-12的錶達.結論:成功構建能在真覈細胞中錶達bcr/abl和mIL-12的重組質粒PBBGI,為進一步研究bcr/abl基因疫苗誘導腫瘤特異性細胞免疫奠定瞭基礎.
목적:구건유당기화린지선기순(GPI)묘정수식적bcr/abl화서IL-12(mIL-12)진핵쌍표체질립,재COS-7세포중검측기기인화막단백표체.방법:이함유만립백혈병(b3a2형)migP210전장서렬적질립위모판,통과PCR확증획득654 bp적bcr/abl융합기인편단,매절후삽입pBudCE4.1공재중,경감정획득중조질립pBB.동시,RT-PCR확증인외주혈림파세포CD24분자중적GPI묘정서렬,매절후극륭입pBB질립중여bcr/abl기인편단최기단상련,획득중조질립pBBG병감정.연후확증mIL-12기인편단병아극륭입pBBG령일다극륭위점,구건중조질립pBBGI.재다취양리자개도하장pBBGI질립전염COS-7세포,채용RT-PCR, Western Blot검측bcr/abl융합기인급기단백적표체,ELISA검측mIL-12적표체.결과:경매절화측서감정증실,유GPI묘정련접적bcr/abl급mIL-12기인삽입편단정학;전염세포중유bcr/abl융합기인、전염세포막상유bcr/abl융합단백적표체,세포배양상청중야유mIL-12적표체.결론:성공구건능재진핵세포중표체bcr/abl화mIL-12적중조질립PBBGI,위진일보연구bcr/abl기인역묘유도종류특이성세포면역전정료기출.
