职业卫生与病伤
職業衛生與病傷
직업위생여병상
JOURNAL OF OCCUPATIONAL HEALTH AND DAMAGE
2008年
2期
67-70
,共4页
尿嘧啶DNA糖基化酶(UDC)%脱氧尿嘧啶(OUTP)%荧光定量PCR
尿嘧啶DNA糖基化酶(UDC)%脫氧尿嘧啶(OUTP)%熒光定量PCR
뇨밀정DNA당기화매(UDC)%탈양뇨밀정(OUTP)%형광정량PCR
目的 探讨脱氧尿嘧啶及尿嘧啶DNA糖基化酶抗PCR产物污染的能力.方法 用Taq-Man荧光定量PCR检测方法进行定量检测.将一系列不同浓度的含dUTP的HBVvDNA PCR扩增产物作为污染源,分别加至含dUTP/UDC的PCR反应体系和普通荧光定量PCR反应体系中,在荧光定量PCR仪上进行定量检测,从而得出含dUTP/UDC的PCR反应体系的抗污染能力.结果 最佳抗污染实验条件:UDG酶含量0.05 U,消化时间37℃5 min,灭活时间92℃ 1 min;dUTP100%代替dTIP.含0.05 U的UDG抗污染反应体系对每管浓度为103拷贝/ml的污染物可完全消化,并随UDC含量的增高及消化时间的延长,抗污染能力增强.结论 dUTP/UDG反应体系的应用能有效防止PCR产物污染,但抗污染能力是有一定限度的,尚需加强实验室标准化管理,才能真正达到抗污染效果.
目的 探討脫氧尿嘧啶及尿嘧啶DNA糖基化酶抗PCR產物汙染的能力.方法 用Taq-Man熒光定量PCR檢測方法進行定量檢測.將一繫列不同濃度的含dUTP的HBVvDNA PCR擴增產物作為汙染源,分彆加至含dUTP/UDC的PCR反應體繫和普通熒光定量PCR反應體繫中,在熒光定量PCR儀上進行定量檢測,從而得齣含dUTP/UDC的PCR反應體繫的抗汙染能力.結果 最佳抗汙染實驗條件:UDG酶含量0.05 U,消化時間37℃5 min,滅活時間92℃ 1 min;dUTP100%代替dTIP.含0.05 U的UDG抗汙染反應體繫對每管濃度為103拷貝/ml的汙染物可完全消化,併隨UDC含量的增高及消化時間的延長,抗汙染能力增彊.結論 dUTP/UDG反應體繫的應用能有效防止PCR產物汙染,但抗汙染能力是有一定限度的,尚需加彊實驗室標準化管理,纔能真正達到抗汙染效果.
목적 탐토탈양뇨밀정급뇨밀정DNA당기화매항PCR산물오염적능력.방법 용Taq-Man형광정량PCR검측방법진행정량검측.장일계렬불동농도적함dUTP적HBVvDNA PCR확증산물작위오염원,분별가지함dUTP/UDC적PCR반응체계화보통형광정량PCR반응체계중,재형광정량PCR의상진행정량검측,종이득출함dUTP/UDC적PCR반응체계적항오염능력.결과 최가항오염실험조건:UDG매함량0.05 U,소화시간37℃5 min,멸활시간92℃ 1 min;dUTP100%대체dTIP.함0.05 U적UDG항오염반응체계대매관농도위103고패/ml적오염물가완전소화,병수UDC함량적증고급소화시간적연장,항오염능력증강.결론 dUTP/UDG반응체계적응용능유효방지PCR산물오염,단항오염능력시유일정한도적,상수가강실험실표준화관리,재능진정체도항오염효과.
