北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2008年
5期
509-513
,共5页
张兰%黄海长%李惊子%刘颖
張蘭%黃海長%李驚子%劉穎
장란%황해장%리량자%류영
西罗莫司%成纤维细胞%纤连蛋白类%胶原Ⅰ型
西囉莫司%成纖維細胞%纖連蛋白類%膠原Ⅰ型
서라막사%성섬유세포%섬련단백류%효원Ⅰ형
目的:在细胞水平探讨西罗莫司[sirolimus,又名雷帕霉素(rapamycin)]的抗肾纤维化作用.方法:采用原代培养的大鼠肾皮质肌成纤维细胞(myofibmblast,MyoF).实验各时间点分别设对照组和用西罗莫司40 mg/L处理组.将细胞培养12 h,24 h,48 h后分别收集细胞和细胞培养上清液,用Western blot方法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,Col-Ⅰ)和上清液中FN,Col-Ⅰ蛋白水平的表达;用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)法检测细胞培养1 h,2 h,4h,6 h各时间点前胶原Ⅰ(procollagen-Ⅰ)mRNA表达的变化;用明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性.实验结果分别以各时间点对照组作为基线1,计算与对照组的比值.结果:(1)西罗莫司于各个时间点对细胞内α-SMA的表达均无影响.(2)用西罗莫司处理后,于24 h对细胞内Col-Ⅰ蛋白表达量明显少于对照组,并持续至48 h,分别为各时间点对照组的(0.58±0.05)倍和(0.63±0.18)倍,差异有统计学意义(P<0.05).(3)与各时间点对照组相比,细胞内procollagen-Ⅰ mRNA在1 h,2 h时表达均减少,分别为(0.38±0.05)倍和(0.55±0.16)倍,差异有统计学意义(P<0.05),于4 h恢复到基础水平.(4)培养细胞上清液中12 h即有Col-Ⅰ基础表达,经西罗莫司处理24 h其表达量较对照组明显减少,为对照组的(0.59±0.25)倍,差异有统计学意义(P<0.05),持续至48 h仍呈减少趋势.为对照组的(0.52±0.21)倍,P<0.05.(5)细胞内FN蛋白表达趋势与上清液中一致,24 h其表达量较对照组明显减少,分别为对照组的(0.44±0.09)倍和(0.40±0.15)倍,差异均具有统计学意义(P<0.05),48h西罗莫司对FN的抑制作用消失.(6)经西罗莫司处理12 h,24 h和48 h,上清液中MMP-2和MMP-9的活性均无明显变化.结论:西罗莫司可以通过抑制MyoF的Col-Ⅰ和或FN的表达而发挥其抗肾纤维化的作用.
目的:在細胞水平探討西囉莫司[sirolimus,又名雷帕黴素(rapamycin)]的抗腎纖維化作用.方法:採用原代培養的大鼠腎皮質肌成纖維細胞(myofibmblast,MyoF).實驗各時間點分彆設對照組和用西囉莫司40 mg/L處理組.將細胞培養12 h,24 h,48 h後分彆收集細胞和細胞培養上清液,用Western blot方法檢測細胞內α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纖維連接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型膠原(type Ⅰ collagen,Col-Ⅰ)和上清液中FN,Col-Ⅰ蛋白水平的錶達;用實時熒光定量PCR(real-time quantitative PCR)法檢測細胞培養1 h,2 h,4h,6 h各時間點前膠原Ⅰ(procollagen-Ⅰ)mRNA錶達的變化;用明膠酶譜法檢測細胞培養上清液中基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性.實驗結果分彆以各時間點對照組作為基線1,計算與對照組的比值.結果:(1)西囉莫司于各箇時間點對細胞內α-SMA的錶達均無影響.(2)用西囉莫司處理後,于24 h對細胞內Col-Ⅰ蛋白錶達量明顯少于對照組,併持續至48 h,分彆為各時間點對照組的(0.58±0.05)倍和(0.63±0.18)倍,差異有統計學意義(P<0.05).(3)與各時間點對照組相比,細胞內procollagen-Ⅰ mRNA在1 h,2 h時錶達均減少,分彆為(0.38±0.05)倍和(0.55±0.16)倍,差異有統計學意義(P<0.05),于4 h恢複到基礎水平.(4)培養細胞上清液中12 h即有Col-Ⅰ基礎錶達,經西囉莫司處理24 h其錶達量較對照組明顯減少,為對照組的(0.59±0.25)倍,差異有統計學意義(P<0.05),持續至48 h仍呈減少趨勢.為對照組的(0.52±0.21)倍,P<0.05.(5)細胞內FN蛋白錶達趨勢與上清液中一緻,24 h其錶達量較對照組明顯減少,分彆為對照組的(0.44±0.09)倍和(0.40±0.15)倍,差異均具有統計學意義(P<0.05),48h西囉莫司對FN的抑製作用消失.(6)經西囉莫司處理12 h,24 h和48 h,上清液中MMP-2和MMP-9的活性均無明顯變化.結論:西囉莫司可以通過抑製MyoF的Col-Ⅰ和或FN的錶達而髮揮其抗腎纖維化的作用.
목적:재세포수평탐토서라막사[sirolimus,우명뢰파매소(rapamycin)]적항신섬유화작용.방법:채용원대배양적대서신피질기성섬유세포(myofibmblast,MyoF).실험각시간점분별설대조조화용서라막사40 mg/L처리조.장세포배양12 h,24 h,48 h후분별수집세포화세포배양상청액,용Western blot방법검측세포내α-평활기기동단백(α-smooth muscle actin,α-SMA)、섬유련접단백(fibronectin,FN)、Ⅰ형효원(type Ⅰ collagen,Col-Ⅰ)화상청액중FN,Col-Ⅰ단백수평적표체;용실시형광정량PCR(real-time quantitative PCR)법검측세포배양1 h,2 h,4h,6 h각시간점전효원Ⅰ(procollagen-Ⅰ)mRNA표체적변화;용명효매보법검측세포배양상청액중기질금속단백매-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)화기질금속단백매-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)적활성.실험결과분별이각시간점대조조작위기선1,계산여대조조적비치.결과:(1)서라막사우각개시간점대세포내α-SMA적표체균무영향.(2)용서라막사처리후,우24 h대세포내Col-Ⅰ단백표체량명현소우대조조,병지속지48 h,분별위각시간점대조조적(0.58±0.05)배화(0.63±0.18)배,차이유통계학의의(P<0.05).(3)여각시간점대조조상비,세포내procollagen-Ⅰ mRNA재1 h,2 h시표체균감소,분별위(0.38±0.05)배화(0.55±0.16)배,차이유통계학의의(P<0.05),우4 h회복도기출수평.(4)배양세포상청액중12 h즉유Col-Ⅰ기출표체,경서라막사처리24 h기표체량교대조조명현감소,위대조조적(0.59±0.25)배,차이유통계학의의(P<0.05),지속지48 h잉정감소추세.위대조조적(0.52±0.21)배,P<0.05.(5)세포내FN단백표체추세여상청액중일치,24 h기표체량교대조조명현감소,분별위대조조적(0.44±0.09)배화(0.40±0.15)배,차이균구유통계학의의(P<0.05),48h서라막사대FN적억제작용소실.(6)경서라막사처리12 h,24 h화48 h,상청액중MMP-2화MMP-9적활성균무명현변화.결론:서라막사가이통과억제MyoF적Col-Ⅰ화혹FN적표체이발휘기항신섬유화적작용.
