中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2005年
2期
99-101
,共3页
朴文花%张恒辉%何豫%朴桂花%许文燮%李在琉%王贵强
樸文花%張恆輝%何豫%樸桂花%許文燮%李在琉%王貴彊
박문화%장항휘%하예%박계화%허문섭%리재류%왕귀강
β2-M%pET-22b(+)载体%表达%纯化%四聚体
β2-M%pET-22b(+)載體%錶達%純化%四聚體
β2-M%pET-22b(+)재체%표체%순화%사취체
目的:构建人β2-microglobulin(β2-M)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中高效表达β2-M蛋白质并进行纯化,为构建MHC-肽四聚体奠定基础.方法:从人外周血单核细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出去除信号肽部分的β2-M基因,克隆pET-22b(+)表达载体进行诱导表达.采用离子交换层析和凝胶过滤方法对表达产物进行纯化,用ELISA和Western blot法进行免疫学鉴定.结果:成功地构建了表达载体pET-22b(+)-β2-M,对表达产物进行了纯化,并对表达产物进行了鉴定.结论:获得β2-M蛋白的高效表达,为进一步利用亲和素在体外构建MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定了基础.
目的:構建人β2-microglobulin(β2-M)基因的原覈錶達載體,在大腸桿菌中高效錶達β2-M蛋白質併進行純化,為構建MHC-肽四聚體奠定基礎.方法:從人外週血單覈細胞中提取總RNA,採用RT-PCR技術擴增齣去除信號肽部分的β2-M基因,剋隆pET-22b(+)錶達載體進行誘導錶達.採用離子交換層析和凝膠過濾方法對錶達產物進行純化,用ELISA和Western blot法進行免疫學鑒定.結果:成功地構建瞭錶達載體pET-22b(+)-β2-M,對錶達產物進行瞭純化,併對錶達產物進行瞭鑒定.結論:穫得β2-M蛋白的高效錶達,為進一步利用親和素在體外構建MHC-Ⅰ類分子肽四聚體奠定瞭基礎.
목적:구건인β2-microglobulin(β2-M)기인적원핵표체재체,재대장간균중고효표체β2-M단백질병진행순화,위구건MHC-태사취체전정기출.방법:종인외주혈단핵세포중제취총RNA,채용RT-PCR기술확증출거제신호태부분적β2-M기인,극륭pET-22b(+)표체재체진행유도표체.채용리자교환층석화응효과려방법대표체산물진행순화,용ELISA화Western blot법진행면역학감정.결과:성공지구건료표체재체pET-22b(+)-β2-M,대표체산물진행료순화,병대표체산물진행료감정.결론:획득β2-M단백적고효표체,위진일보이용친화소재체외구건MHC-Ⅰ류분자태사취체전정료기출.
