重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2012年
1期
51-53,57
,共4页
β防御素%基因表达%间质干细胞%抗菌活性
β防禦素%基因錶達%間質榦細胞%抗菌活性
β방어소%기인표체%간질간세포%항균활성
目的 构建人β防御素3(HBD3)基因真核表达质粒载体,观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达,并检测其活性.方法 利用RT-PCR方法从牙龈组织中扩增出HBD3基因片段,通过DNA重组技术将基因片段重组于pVIVO1-mcs真核表达质粒载体上,构建成pVIVO1-HBD3重组质粒载体,分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组质粒载体进行鉴定.运用jetPEI转染试剂将重组质粒转染BMSCs后,RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测目的 基因的表达.取转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液,采用K-B纸片扩散法进行抗菌活性实验.结果 (1)酶切电泳分析得到相应的目的 片段,大小与理论计算值一致,DNA测序证实目的 基因序列正确无突变,成功构建真核表达质粒载体pVIVO1-HBD3.(2)RT-PCR和免疫荧光、蛋白质印迹法分别从mRNA和蛋白质2个水平证实转染的BMSCs高表达HBD3.(3)转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液对白色念珠菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌产生明显的抑菌环,证实了表达分泌出的HBD3的抗菌活性.结论 构建了pVIVO1-HBD3基因真核表达质粒载体,证实其转染BMSCs后基因的表达和活性.
目的 構建人β防禦素3(HBD3)基因真覈錶達質粒載體,觀察其在大鼠骨髓間充質榦細胞(BMSCs)中的錶達,併檢測其活性.方法 利用RT-PCR方法從牙齦組織中擴增齣HBD3基因片段,通過DNA重組技術將基因片段重組于pVIVO1-mcs真覈錶達質粒載體上,構建成pVIVO1-HBD3重組質粒載體,分彆用酶切電泳分析及DNA測序的方法對重組質粒載體進行鑒定.運用jetPEI轉染試劑將重組質粒轉染BMSCs後,RT-PCR、免疫熒光和蛋白質印跡法檢測目的 基因的錶達.取轉染重組質粒的BMSCs無血清上清的濃縮液,採用K-B紙片擴散法進行抗菌活性實驗.結果 (1)酶切電泳分析得到相應的目的 片段,大小與理論計算值一緻,DNA測序證實目的 基因序列正確無突變,成功構建真覈錶達質粒載體pVIVO1-HBD3.(2)RT-PCR和免疫熒光、蛋白質印跡法分彆從mRNA和蛋白質2箇水平證實轉染的BMSCs高錶達HBD3.(3)轉染重組質粒的BMSCs無血清上清的濃縮液對白色唸珠菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄毬菌和枯草芽孢桿菌產生明顯的抑菌環,證實瞭錶達分泌齣的HBD3的抗菌活性.結論 構建瞭pVIVO1-HBD3基因真覈錶達質粒載體,證實其轉染BMSCs後基因的錶達和活性.
목적 구건인β방어소3(HBD3)기인진핵표체질립재체,관찰기재대서골수간충질간세포(BMSCs)중적표체,병검측기활성.방법 이용RT-PCR방법종아간조직중확증출HBD3기인편단,통과DNA중조기술장기인편단중조우pVIVO1-mcs진핵표체질립재체상,구건성pVIVO1-HBD3중조질립재체,분별용매절전영분석급DNA측서적방법대중조질립재체진행감정.운용jetPEI전염시제장중조질립전염BMSCs후,RT-PCR、면역형광화단백질인적법검측목적 기인적표체.취전염중조질립적BMSCs무혈청상청적농축액,채용K-B지편확산법진행항균활성실험.결과 (1)매절전영분석득도상응적목적 편단,대소여이론계산치일치,DNA측서증실목적 기인서렬정학무돌변,성공구건진핵표체질립재체pVIVO1-HBD3.(2)RT-PCR화면역형광、단백질인적법분별종mRNA화단백질2개수평증실전염적BMSCs고표체HBD3.(3)전염중조질립적BMSCs무혈청상청적농축액대백색념주균、대장애희균、록농간균、금황색포도구균화고초아포간균산생명현적억균배,증실료표체분비출적HBD3적항균활성.결론 구건료pVIVO1-HBD3기인진핵표체질립재체,증실기전염BMSCs후기인적표체화활성.
