中华神经外科疾病研究杂志
中華神經外科疾病研究雜誌
중화신경외과질병연구잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROSURGICAL DISEASE RESEARCH
2012年
1期
28-31
,共4页
黄庆锋%施炜%陈建%高宜录%顾志恺
黃慶鋒%施煒%陳建%高宜錄%顧誌愷
황경봉%시위%진건%고의록%고지개
垂体瘤转化基因1%微小RNA%胶质瘤%细胞增殖%凋亡
垂體瘤轉化基因1%微小RNA%膠質瘤%細胞增殖%凋亡
수체류전화기인1%미소RNA%효질류%세포증식%조망
目的 构建表达靶向抑制垂体瘤转化基因1 (PTTG1)基因表达的RNA干扰载体microRNA,导入人脑胶质瘤细胞株U251中,研究靶向抑制PTTG1基因对U251细胞的凋亡诱导作用.方法 以PTG1为靶基因,根据pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体要求,设计针对PTIG1的microRNA序列,脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,采用荧光定量多聚酶链反应(PCR)以及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;膜联蛋白Ⅴ与碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双色标记的流式细胞仪法检测microRNA诱导的细胞凋亡,碘化丙锭(PI)染色检测细胞周期阻滞.结果 实时荧光定量PCR以及Western blot检测显示,PTTG1基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;转染后,流式细胞仪检测分析显示,PTTG1基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞.结论 靶向PTTG1基因的重组microRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PTTG1介导的RNAi显著靶向抑制了PTTG1基因在人脑胶质瘤细胞中的表达,并明显地诱导了脑胶质瘤细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期阻滞.
目的 構建錶達靶嚮抑製垂體瘤轉化基因1 (PTTG1)基因錶達的RNA榦擾載體microRNA,導入人腦膠質瘤細胞株U251中,研究靶嚮抑製PTTG1基因對U251細胞的凋亡誘導作用.方法 以PTG1為靶基因,根據pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR載體要求,設計針對PTIG1的microRNA序列,脂質體轉染法將重組質粒轉入U251細胞,採用熒光定量多聚酶鏈反應(PCR)以及Western blot分彆從mRNA和蛋白水平檢測榦擾效果;膜聯蛋白Ⅴ與碘化丙啶(annexinⅤ/PI)雙色標記的流式細胞儀法檢測microRNA誘導的細胞凋亡,碘化丙錠(PI)染色檢測細胞週期阻滯.結果 實時熒光定量PCR以及Western blot檢測顯示,PTTG1基因的mRNA轉錄水平以及蛋白水平的錶達均得到顯著抑製;轉染後,流式細胞儀檢測分析顯示,PTTG1基因錶達被抑製後,U251細胞凋亡率明顯增高,細胞週期齣現明顯的G2/M阻滯.結論 靶嚮PTTG1基因的重組microRNA榦擾載體pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PTTG1介導的RNAi顯著靶嚮抑製瞭PTTG1基因在人腦膠質瘤細胞中的錶達,併明顯地誘導瞭腦膠質瘤細胞髮生凋亡和G2/M期細胞週期阻滯.
목적 구건표체파향억제수체류전화기인1 (PTTG1)기인표체적RNA간우재체microRNA,도입인뇌효질류세포주U251중,연구파향억제PTTG1기인대U251세포적조망유도작용.방법 이PTG1위파기인,근거pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR재체요구,설계침대PTIG1적microRNA서렬,지질체전염법장중조질립전입U251세포,채용형광정량다취매련반응(PCR)이급Western blot분별종mRNA화단백수평검측간우효과;막련단백Ⅴ여전화병정(annexinⅤ/PI)쌍색표기적류식세포의법검측microRNA유도적세포조망,전화병정(PI)염색검측세포주기조체.결과 실시형광정량PCR이급Western blot검측현시,PTTG1기인적mRNA전록수평이급단백수평적표체균득도현저억제;전염후,류식세포의검측분석현시,PTTG1기인표체피억제후,U251세포조망솔명현증고,세포주기출현명현적G2/M조체.결론 파향PTTG1기인적중조microRNA간우재체pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PTTG1개도적RNAi현저파향억제료PTTG1기인재인뇌효질류세포중적표체,병명현지유도료뇌효질류세포발생조망화G2/M기세포주기조체.
