军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2012年
8期
603-607
,共5页
杨丽娟%赵莎%张海谱%姚智燕%胡洁%单保恩
楊麗娟%趙莎%張海譜%姚智燕%鬍潔%單保恩
양려연%조사%장해보%요지연%호길%단보은
白细胞介素17%转染%乳腺肿瘤
白細胞介素17%轉染%乳腺腫瘤
백세포개소17%전염%유선종류
目的 建立稳定转染小鼠IL-17基因全长的小鼠乳腺癌4T1细胞株,并进行鉴定.方法 脂质体法将携带小鼠IL-17基因全长的真核表达载体pcDNA3.1转染小鼠乳腺癌细胞4TI,经G418筛选出稳定表达IL-17的细胞株;镜下观察细胞形态,RT-PCR法、Western印迹和激光共聚焦法检测目的 基因和蛋白的表达;收集转染和未转染IL-17的4T1细胞的培养上清,分别与巨噬细胞RAW264.7共培养,ELISA法检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6水平;MTS法检测细胞的增殖情况,流式细胞技术检测细胞周期、凋亡以及细胞表面MHC I、MHCⅡ、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)等分子表达.结果 获得1株稳定表达IL-17的4T1细胞,而且其培养上清可刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7产生IL-6,证明该细胞可表达功能性IL-17.结论 成功建立了稳定转染IL-17基因的小鼠乳腺癌细胞株.
目的 建立穩定轉染小鼠IL-17基因全長的小鼠乳腺癌4T1細胞株,併進行鑒定.方法 脂質體法將攜帶小鼠IL-17基因全長的真覈錶達載體pcDNA3.1轉染小鼠乳腺癌細胞4TI,經G418篩選齣穩定錶達IL-17的細胞株;鏡下觀察細胞形態,RT-PCR法、Western印跡和激光共聚焦法檢測目的 基因和蛋白的錶達;收集轉染和未轉染IL-17的4T1細胞的培養上清,分彆與巨噬細胞RAW264.7共培養,ELISA法檢測RAW264.7細胞培養上清中IL-6水平;MTS法檢測細胞的增殖情況,流式細胞技術檢測細胞週期、凋亡以及細胞錶麵MHC I、MHCⅡ、淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)等分子錶達.結果 穫得1株穩定錶達IL-17的4T1細胞,而且其培養上清可刺激小鼠巨噬細胞RAW264.7產生IL-6,證明該細胞可錶達功能性IL-17.結論 成功建立瞭穩定轉染IL-17基因的小鼠乳腺癌細胞株.
목적 건립은정전염소서IL-17기인전장적소서유선암4T1세포주,병진행감정.방법 지질체법장휴대소서IL-17기인전장적진핵표체재체pcDNA3.1전염소서유선암세포4TI,경G418사선출은정표체IL-17적세포주;경하관찰세포형태,RT-PCR법、Western인적화격광공취초법검측목적 기인화단백적표체;수집전염화미전염IL-17적4T1세포적배양상청,분별여거서세포RAW264.7공배양,ELISA법검측RAW264.7세포배양상청중IL-6수평;MTS법검측세포적증식정황,류식세포기술검측세포주기、조망이급세포표면MHC I、MHCⅡ、림파세포공능상관항원-1(LFA-1)등분자표체.결과 획득1주은정표체IL-17적4T1세포,이차기배양상청가자격소서거서세포RAW264.7산생IL-6,증명해세포가표체공능성IL-17.결론 성공건립료은정전염IL-17기인적소서유선암세포주.
