生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
4期
113-117
,共5页
美洲大蠊%3-磷酸甘油醛脱氢酶%克隆%序列分析%原核表达
美洲大蠊%3-燐痠甘油醛脫氫酶%剋隆%序列分析%原覈錶達
미주대렴%3-린산감유철탈경매%극륭%서렬분석%원핵표체
旨在通过5’-RACE获得美洲大蠊3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,为进一步研究其功能奠定基础.通过3’-RACE技术,PCR扩增获取编码美洲大蠊GAPDH蛋白的全长cDNA序列；采用生物信息学方法推导出该序列编码的氨基酸序列及其理化性质；预测信号肽、蛋白疏水性、可溶性、跨膜区结构、二级结构、三级结构,并构建系统发育树；构建原核表达载体pET28a-GAPDH,IPTG诱导重组蛋白表达,并用Histag抗体Western blotting验证.结果显示,美洲大蠊GAPDH基因,其完整阅读框含999个碱基,编码332个氨基酸.序列分析显示,该蛋白与家蚕GAPDH相似性为89％,具有GAPDH保守功能域,经IPTG诱导获得重组蛋白.
旨在通過5’-RACE穫得美洲大蠊3-燐痠甘油醛脫氫酶(GAPDH)基因的全長cDNA序列,進行生物信息學分析,構建原覈錶達載體,誘導重組蛋白錶達,為進一步研究其功能奠定基礎.通過3’-RACE技術,PCR擴增穫取編碼美洲大蠊GAPDH蛋白的全長cDNA序列；採用生物信息學方法推導齣該序列編碼的氨基痠序列及其理化性質；預測信號肽、蛋白疏水性、可溶性、跨膜區結構、二級結構、三級結構,併構建繫統髮育樹；構建原覈錶達載體pET28a-GAPDH,IPTG誘導重組蛋白錶達,併用Histag抗體Western blotting驗證.結果顯示,美洲大蠊GAPDH基因,其完整閱讀框含999箇堿基,編碼332箇氨基痠.序列分析顯示,該蛋白與傢蠶GAPDH相似性為89％,具有GAPDH保守功能域,經IPTG誘導穫得重組蛋白.
지재통과5’-RACE획득미주대렴3-린산감유철탈경매(GAPDH)기인적전장cDNA서렬,진행생물신식학분석,구건원핵표체재체,유도중조단백표체,위진일보연구기공능전정기출.통과3’-RACE기술,PCR확증획취편마미주대렴GAPDH단백적전장cDNA서렬；채용생물신식학방법추도출해서렬편마적안기산서렬급기이화성질；예측신호태、단백소수성、가용성、과막구결구、이급결구、삼급결구,병구건계통발육수；구건원핵표체재체pET28a-GAPDH,IPTG유도중조단백표체,병용Histag항체Western blotting험증.결과현시,미주대렴GAPDH기인,기완정열독광함999개감기,편마332개안기산.서렬분석현시,해단백여가잠GAPDH상사성위89％,구유GAPDH보수공능역,경IPTG유도획득중조단백.
