生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
3期
38-43
,共6页
食线虫真菌%Dactylellina cionopaga%丝氨酸蛋白酶%外源表达%黑曲霉%表达载体
食線蟲真菌%Dactylellina cionopaga%絲氨痠蛋白酶%外源錶達%黑麯黴%錶達載體
식선충진균%Dactylellina cionopaga%사안산단백매%외원표체%흑곡매%표체재체
目的:Dactylellina cionopaga是产生黏性分枝的捕食线虫真菌,进行其基因外源表达是鉴定该菌侵染相关因子的途径之一.方法:该文构建了含有组氨酸标签的黑曲霉表达载体pGT21M -HIS,对D.cionopaga中与侵染机制相关的丝氨酸蛋白酶基因PrDⅠ进行了外源表达.结果:RT - PCR鉴定结果显示,PDⅠ在黑曲霉201中获得了转录.SDS - PAGE和酶活分析结果表明,经亲和层析纯化的重组蛋白分子量约为45kDa,在pH5.0的条件下具有蛋白水解活性.纯酶液的蛋白浓度为30μg/ml.结论:构建的带有组氨酸标签的表达载体pGT21M -HIS能够用于基因在黑曲霉表达系统中的外源表达,并为目的蛋白的纯化和鉴定提供了极大便利.黑曲霉外源表达系统在表达丝状真菌基因方面相对其他表达系统具有优势.
目的:Dactylellina cionopaga是產生黏性分枝的捕食線蟲真菌,進行其基因外源錶達是鑒定該菌侵染相關因子的途徑之一.方法:該文構建瞭含有組氨痠標籤的黑麯黴錶達載體pGT21M -HIS,對D.cionopaga中與侵染機製相關的絲氨痠蛋白酶基因PrDⅠ進行瞭外源錶達.結果:RT - PCR鑒定結果顯示,PDⅠ在黑麯黴201中穫得瞭轉錄.SDS - PAGE和酶活分析結果錶明,經親和層析純化的重組蛋白分子量約為45kDa,在pH5.0的條件下具有蛋白水解活性.純酶液的蛋白濃度為30μg/ml.結論:構建的帶有組氨痠標籤的錶達載體pGT21M -HIS能夠用于基因在黑麯黴錶達繫統中的外源錶達,併為目的蛋白的純化和鑒定提供瞭極大便利.黑麯黴外源錶達繫統在錶達絲狀真菌基因方麵相對其他錶達繫統具有優勢.
목적:Dactylellina cionopaga시산생점성분지적포식선충진균,진행기기인외원표체시감정해균침염상관인자적도경지일.방법:해문구건료함유조안산표첨적흑곡매표체재체pGT21M -HIS,대D.cionopaga중여침염궤제상관적사안산단백매기인PrDⅠ진행료외원표체.결과:RT - PCR감정결과현시,PDⅠ재흑곡매201중획득료전록.SDS - PAGE화매활분석결과표명,경친화층석순화적중조단백분자량약위45kDa,재pH5.0적조건하구유단백수해활성.순매액적단백농도위30μg/ml.결론:구건적대유조안산표첨적표체재체pGT21M -HIS능구용우기인재흑곡매표체계통중적외원표체,병위목적단백적순화화감정제공료겁대편리.흑곡매외원표체계통재표체사상진균기인방면상대기타표체계통구유우세.
