CAJ | 학술논문

心肌营养素是一种具有心肌保护功能的细胞因子.为鉴定人心肌营养素在体外具有促进受损大鼠心肌细胞存活的生物学活性,构建pQE-huCT-1表达载体,在大肠杆菌中表达重组人心肌营养素(rhCT-1);利用含有还原型及氧化型谷胱甘肽的复性体系,恢复变性蛋白的天然构象;通过MTT法鉴定rhCT-1的促进受损大鼠心肌细胞存活的生物学活性.pQE-huCT-1在M15菌中得到高效表达,但95%的目的蛋白以包涵体形式存在;通过变性、复性及Ni-NTA纯化,得到纯度为90%的可溶性重组蛋白.利用无血清培养基培养新生大鼠心肌细胞,造成缺血损伤;利用低浓度阿霉素损伤大鼠心肌细胞,构建阿霉素损伤模型;通过加入rhCT-1治疗,发现rhCT-1具有明显的促进受损心肌细胞存活的作用;心肌细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性随rhCT-1浓度的升高而增强,且呈显著的剂量依赖性关系;通过测定预防组和治疗组心肌细胞SDH和乳酸脱氢酶(LDH)活性,发现预防组较治疗组在促进细胞线粒体产生SDH和降低培养液上清LDH活性方面效果更加显著,说明rhCT-1可能是在心肌细胞损伤早期通过抑制细胞凋亡而达到心肌保护作用的.本研究通过复性获得了可溶性rhCT-1,它在体外具有显著的促进受损心肌细胞存活的生物学活性.
심기영양소시일충구유심기보호공능적세포인자.위감정인심기영양소재체외구유촉진수손대서심기세포존활적생물학활성,구건pQE-huCT-1표체재체,재대장간균중표체중조인심기영양소(rhCT-1);이용함유환원형급양화형곡광감태적복성체계,회복변성단백적천연구상;통과MTT법감정rhCT-1적촉진수손대서심기세포존활적생물학활성.pQE-huCT-1재M15균중득도고효표체,단95%적목적단백이포함체형식존재;통과변성、복성급Ni-NTA순화,득도순도위90%적가용성중조단백.이용무혈청배양기배양신생대서심기세포,조성결혈손상;이용저농도아매소손상대서심기세포,구건아매소손상모형;통과가입rhCT-1치료,발현rhCT-1구유명현적촉진수손심기세포존활적작용;심기세포호박산탈경매(SDH)활성수rhCT-1농도적승고이증강,차정현저적제량의뢰성관계;통과측정예방조화치료조심기세포SDH화유산탈경매(LDH)활성,발현예방조교치료조재촉진세포선립체산생SDH화강저배양액상청LDH활성방면효과경가현저,설명rhCT-1가능시재심기세포손상조기통과억제세포조망이체도심기보호작용적.본연구통과복성획득료가용성rhCT-1,타재체외구유현저적촉진수손심기세포존활적생물학활성.