CAJ | 학술논문

目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-.方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成.6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20 g.收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit+lin-:将获取的lin-细胞悬液8 ℃条件下1 500 r/min离心10 min,弃上清,接80 μL/107加入Buffer重悬细胞.按20 μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4 ℃冰箱孵育15 min,按1 mL/107加入Buffer洗细胞1次,8 ℃条件下1 500 r/min离心10 min,弃上清,按500 μL/108加入Buffer重悬细胞.Buffer 500 μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer 500 μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1 mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit+lin-细胞,收集到c-Kit+lin-细胞,细胞计数.取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit+lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力.计算活细胞的百分率.细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%.结果:10只小鼠均进入结果分析.利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响.结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-,纯度和回放率高,且不影响细胞活力.
목적:이용면역자성세포분선계통분리순화골수연생간간세포아군c-Kit+lin-.방법:실험우2006-07/08재남방의과대학실험동물중심완성.6～8주령적SPF급순계BALB/C웅성소서10지,체질량18～20 g.수집소서고골골수세포,이용면역자성세포분선계통,통과량보법분선순화c-Kit+lin-:장획취적lin-세포현액8 ℃조건하1 500 r/min리심10 min,기상청,접80 μL/107가입Buffer중현세포.안20 μL/107가생물소항체자주,혼균,4 ℃빙상부육15 min,안1 mL/107가입Buffer세세포1차,8 ℃조건하1 500 r/min리심10 min,기상청,안500 μL/108가입Buffer중현세포.Buffer 500 μL윤MS주,현액과주후,Buffer 500 μL/차세주3차,주자탈리자장,가1 mL Buffer,용배투주새추출주중적c-Kit+lin-세포,수집도c-Kit+lin-세포,세포계수.취2.0×106개세포분성10등빈,류식세포의분석c-Kit+lin-세포순도,계산회수솔,평고순화효솔,태반란염색검측순화전후적세포활력.계산활세포적백분솔.세포순도화세포회수솔적계산:세포순도=분리산물중적양성세포수/분리세포적총세포수×100%,세포회수솔=분리산물중적양성세포수/기시표본양성세포총수×100%.결과:10지소서균진입결과분석.이용면역자성세포분선계통분선출적골수연생간간세포아군c-Kit+lin-세포순도화회수솔분별위(77.98±2.34)%,75.40%,순화전후세포활력불수영향.결론:면역자성세포분선계통능유효분선골수연생간간세포아군c-Kit+lin-,순도화회방솔고,차불영향세포활력.