上海医学
上海醫學
상해의학
SHANGHAI MEDICAL JOURNAL
2009年
3期
230-235,插4
,共7页
环孢素A%转化生长因子-β%凋亡%基因治疗
環孢素A%轉化生長因子-β%凋亡%基因治療
배포소A%전화생장인자-β%조망%기인치료
目的 探讨转化生长因子βⅡ型受体免疫球蛋白(Ig)G重链Fc段(TGFβRⅡ/IgG Fc)嵌合蛋白基因转染改善小鼠环孢素A(CsA)肾毒性细胞凋亡的作用.方法 雌性美国癌症研究所(ICR)小鼠予低钠饮食,CsA组和干预组每日皮下注射CsA.在给药的第1天和第7天,CsA组在胫骨肌处注射携带lacZ基因的质粒(pCAGGS-lacZ),干预组注射pCAGGS-TGFkβRⅡ/IgGFc,给药2或3周后处死.血浆和肾组织中转化生长因子(TGF)-β1蛋白水平由酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学法测得.肾组织中TGF-β1 mRNA水平用Northern印迹法测定.利用过碘酸雪夫反应(PAS)和Masson三色染色半定量评分评估肾小管损害和肾间质纤维化程度.采用末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL法)检测肾小管问质细胞凋亡.结果 CsA给药2周后.血浆、肾脏TGF-β1表达及其mRNA水平均达到最高,显著高于对照组(P值分别<0.05、0.01);小管间质病变也逐渐出现,PAS染色半定量评分和Masson套染计算肾皮质胶原容积均显著高于对照组(P值均<0.01);小管间质凋亡细胞百分比显著高于对照组(P<0.01).CsA给药3周后,血浆TGF-β1表达降至正常,肾脏TGF-β1表达及其mRNA水平虽有所下降,但仍显著高于对照组(P值分别<0.01、0.05);小管间质病变较2周时明显加重(P<0.01);而小管间质凋亡细胞表达进一步升高(P<0.01).干预2周组小鼠的血浆及肾组织TGF-β1表达均较CsA 2周组显著下降(P值分别<0.01、0.05),而TGF-β1 mRNA水平无明显改变;Masson套染计算肾皮质胶原容积显著低于CsA 2周组(P<0.05);小管问质凋亡细胞百分比显著低于CsA 2周组(P<0.01).干预3周组的血浆、肾脏TGF-β1表达及其mRNA水平与CsA 3周组的差异均无统计学意义(P值均>0.05);小管间质病变持续减轻,PAS染色半定量评分和Mason套染计算肾皮质胶原容积显著低于CsA 3周组(P值均<0.01);小管问质凋亡细胞百分比显著低于CsA 3周组(P<0.01).小管间质损伤程度和间质纤维化程度均与凋亡细胞百分比呈正相关(r=0.804、0.906.P值均<0.01).结论 TGFβRⅡ/IgG Fc基因转染有效抑制了CsA引起的小管间质病变.细胞过度凋亡参与了慢性CsA肾病的发病,且与小管间质损伤及纤维化程度密切相关.TGF-β1在这一过程中发挥了重要作用,TGFβR Ⅱ/IgG Fc的干预治疗可有效抑制上述改变.
目的 探討轉化生長因子βⅡ型受體免疫毬蛋白(Ig)G重鏈Fc段(TGFβRⅡ/IgG Fc)嵌閤蛋白基因轉染改善小鼠環孢素A(CsA)腎毒性細胞凋亡的作用.方法 雌性美國癌癥研究所(ICR)小鼠予低鈉飲食,CsA組和榦預組每日皮下註射CsA.在給藥的第1天和第7天,CsA組在脛骨肌處註射攜帶lacZ基因的質粒(pCAGGS-lacZ),榦預組註射pCAGGS-TGFkβRⅡ/IgGFc,給藥2或3週後處死.血漿和腎組織中轉化生長因子(TGF)-β1蛋白水平由酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和免疫組織化學法測得.腎組織中TGF-β1 mRNA水平用Northern印跡法測定.利用過碘痠雪伕反應(PAS)和Masson三色染色半定量評分評估腎小管損害和腎間質纖維化程度.採用末耑脫氧覈糖轉移酶介導的生物素化脫氧尿嘧啶缺刻標記技術(TUNEL法)檢測腎小管問質細胞凋亡.結果 CsA給藥2週後.血漿、腎髒TGF-β1錶達及其mRNA水平均達到最高,顯著高于對照組(P值分彆<0.05、0.01);小管間質病變也逐漸齣現,PAS染色半定量評分和Masson套染計算腎皮質膠原容積均顯著高于對照組(P值均<0.01);小管間質凋亡細胞百分比顯著高于對照組(P<0.01).CsA給藥3週後,血漿TGF-β1錶達降至正常,腎髒TGF-β1錶達及其mRNA水平雖有所下降,但仍顯著高于對照組(P值分彆<0.01、0.05);小管間質病變較2週時明顯加重(P<0.01);而小管間質凋亡細胞錶達進一步升高(P<0.01).榦預2週組小鼠的血漿及腎組織TGF-β1錶達均較CsA 2週組顯著下降(P值分彆<0.01、0.05),而TGF-β1 mRNA水平無明顯改變;Masson套染計算腎皮質膠原容積顯著低于CsA 2週組(P<0.05);小管問質凋亡細胞百分比顯著低于CsA 2週組(P<0.01).榦預3週組的血漿、腎髒TGF-β1錶達及其mRNA水平與CsA 3週組的差異均無統計學意義(P值均>0.05);小管間質病變持續減輕,PAS染色半定量評分和Mason套染計算腎皮質膠原容積顯著低于CsA 3週組(P值均<0.01);小管問質凋亡細胞百分比顯著低于CsA 3週組(P<0.01).小管間質損傷程度和間質纖維化程度均與凋亡細胞百分比呈正相關(r=0.804、0.906.P值均<0.01).結論 TGFβRⅡ/IgG Fc基因轉染有效抑製瞭CsA引起的小管間質病變.細胞過度凋亡參與瞭慢性CsA腎病的髮病,且與小管間質損傷及纖維化程度密切相關.TGF-β1在這一過程中髮揮瞭重要作用,TGFβR Ⅱ/IgG Fc的榦預治療可有效抑製上述改變.
목적 탐토전화생장인자βⅡ형수체면역구단백(Ig)G중련Fc단(TGFβRⅡ/IgG Fc)감합단백기인전염개선소서배포소A(CsA)신독성세포조망적작용.방법 자성미국암증연구소(ICR)소서여저납음식,CsA조화간예조매일피하주사CsA.재급약적제1천화제7천,CsA조재경골기처주사휴대lacZ기인적질립(pCAGGS-lacZ),간예조주사pCAGGS-TGFkβRⅡ/IgGFc,급약2혹3주후처사.혈장화신조직중전화생장인자(TGF)-β1단백수평유매련면역흡부시험(ELISA)화면역조직화학법측득.신조직중TGF-β1 mRNA수평용Northern인적법측정.이용과전산설부반응(PAS)화Masson삼색염색반정량평분평고신소관손해화신간질섬유화정도.채용말단탈양핵당전이매개도적생물소화탈양뇨밀정결각표기기술(TUNEL법)검측신소관문질세포조망.결과 CsA급약2주후.혈장、신장TGF-β1표체급기mRNA수평균체도최고,현저고우대조조(P치분별<0.05、0.01);소관간질병변야축점출현,PAS염색반정량평분화Masson투염계산신피질효원용적균현저고우대조조(P치균<0.01);소관간질조망세포백분비현저고우대조조(P<0.01).CsA급약3주후,혈장TGF-β1표체강지정상,신장TGF-β1표체급기mRNA수평수유소하강,단잉현저고우대조조(P치분별<0.01、0.05);소관간질병변교2주시명현가중(P<0.01);이소관간질조망세포표체진일보승고(P<0.01).간예2주조소서적혈장급신조직TGF-β1표체균교CsA 2주조현저하강(P치분별<0.01、0.05),이TGF-β1 mRNA수평무명현개변;Masson투염계산신피질효원용적현저저우CsA 2주조(P<0.05);소관문질조망세포백분비현저저우CsA 2주조(P<0.01).간예3주조적혈장、신장TGF-β1표체급기mRNA수평여CsA 3주조적차이균무통계학의의(P치균>0.05);소관간질병변지속감경,PAS염색반정량평분화Mason투염계산신피질효원용적현저저우CsA 3주조(P치균<0.01);소관문질조망세포백분비현저저우CsA 3주조(P<0.01).소관간질손상정도화간질섬유화정도균여조망세포백분비정정상관(r=0.804、0.906.P치균<0.01).결론 TGFβRⅡ/IgG Fc기인전염유효억제료CsA인기적소관간질병변.세포과도조망삼여료만성CsA신병적발병,차여소관간질손상급섬유화정도밀절상관.TGF-β1재저일과정중발휘료중요작용,TGFβR Ⅱ/IgG Fc적간예치료가유효억제상술개변.
