基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2010年
7期
737-742
,共6页
俞晓岚%张志坚%吴秀丽%黄志新
俞曉嵐%張誌堅%吳秀麗%黃誌新
유효람%장지견%오수려%황지신
CXCR4%EGFP%慢病毒%骨髓间充质干细胞%迁移
CXCR4%EGFP%慢病毒%骨髓間充質榦細胞%遷移
CXCR4%EGFP%만병독%골수간충질간세포%천이
目的 构建携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)及CXCR4慢病毒载体,并实现其在大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)中的表达,观察转CXCR4基因后对rMSCs迁移能力的影响. 方法 RT-PCR扩增大鼠CXCR4编码区片段,将其插入慢病毒载体质粒PNL-IRES2-EGFP,获得的PNL-CXCR4-IRES2-EGFP与包装及包膜质粒用脂质体法共转染293T细胞,包装生产慢病毒.所获慢病毒转染rMSCs后,用RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光组织化学和流式细胞术检测转CXCR4基因rMSCs组、转空载体rMSCs组中CXCR4表达情况.利用Transwell方法检测两组rMSCs在SDF-1作用下的迁移能力. 结果 双酶切和测序证实,PNL-CXCR4-IRES2-EGFP构建正确,转CXCR4基因rMSCs组CXCR4表达明显增多,在SDF-1α作用下迁移能力明显增强. 结论 成功构建带有EGFP和大鼠CXCR4的慢病毒载体,并获得CXCR4-rMSCs基因工程细胞,为深入研究SDF/CXCR4轴在rMSCs向损伤组织定向迁移中的作用奠定了基础.
目的 構建攜帶增彊綠色熒光蛋白(EGFP)及CXCR4慢病毒載體,併實現其在大鼠骨髓間充質榦細胞(rMSCs)中的錶達,觀察轉CXCR4基因後對rMSCs遷移能力的影響. 方法 RT-PCR擴增大鼠CXCR4編碼區片段,將其插入慢病毒載體質粒PNL-IRES2-EGFP,穫得的PNL-CXCR4-IRES2-EGFP與包裝及包膜質粒用脂質體法共轉染293T細胞,包裝生產慢病毒.所穫慢病毒轉染rMSCs後,用RT-PCR、Western blot、細胞免疫熒光組織化學和流式細胞術檢測轉CXCR4基因rMSCs組、轉空載體rMSCs組中CXCR4錶達情況.利用Transwell方法檢測兩組rMSCs在SDF-1作用下的遷移能力. 結果 雙酶切和測序證實,PNL-CXCR4-IRES2-EGFP構建正確,轉CXCR4基因rMSCs組CXCR4錶達明顯增多,在SDF-1α作用下遷移能力明顯增彊. 結論 成功構建帶有EGFP和大鼠CXCR4的慢病毒載體,併穫得CXCR4-rMSCs基因工程細胞,為深入研究SDF/CXCR4軸在rMSCs嚮損傷組織定嚮遷移中的作用奠定瞭基礎.
목적 구건휴대증강록색형광단백(EGFP)급CXCR4만병독재체,병실현기재대서골수간충질간세포(rMSCs)중적표체,관찰전CXCR4기인후대rMSCs천이능력적영향. 방법 RT-PCR확증대서CXCR4편마구편단,장기삽입만병독재체질립PNL-IRES2-EGFP,획득적PNL-CXCR4-IRES2-EGFP여포장급포막질립용지질체법공전염293T세포,포장생산만병독.소획만병독전염rMSCs후,용RT-PCR、Western blot、세포면역형광조직화학화류식세포술검측전CXCR4기인rMSCs조、전공재체rMSCs조중CXCR4표체정황.이용Transwell방법검측량조rMSCs재SDF-1작용하적천이능력. 결과 쌍매절화측서증실,PNL-CXCR4-IRES2-EGFP구건정학,전CXCR4기인rMSCs조CXCR4표체명현증다,재SDF-1α작용하천이능력명현증강. 결론 성공구건대유EGFP화대서CXCR4적만병독재체,병획득CXCR4-rMSCs기인공정세포,위심입연구SDF/CXCR4축재rMSCs향손상조직정향천이중적작용전정료기출.
