华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2010年
4期
478-482
,共5页
生精细胞%共培养
生精細胞%共培養
생정세포%공배양
目的 建立生精细胞体外分化(如减数分裂、精子变态)培养体系,为研究精子发生中各种调控因素的作用提供一个良好的细胞模型.方法 取20～22日龄的SD雄性大鼠睾丸,放在预冷的Hanks液中洗2次,用1 mg/mL胶原酶32 ℃消化15～20 min.然后将睾丸剪碎,重复用1 mg/mL胶原酶消化5～10 min.细胞用含10%胎牛血清及各种营养因子的HamF12/DMEM培养液悬浮,按约2×106 /cm2密度分别接种于双室培养槽(双室培养)或放有盖玻片的6孔板(单室培养)中,在32 ℃、95%空气、5%CO2条件下培养.每日在相差显微镜下观察共培养支持细胞/生精细胞的生长状态,定期进行苏木精-伊红染色、BrdU染色.结果 在双室培养2周后,部分生精细胞可见鞭毛出现,培养4周后,培养体系中仍有一定数量的生精细胞附着在支持细胞上,部分生精细胞上可见鞭毛.单室培养的生精细胞在培养第4～5天开始出现明显脱落,培养1周后大多数生精细胞发生脱落死亡,生精细胞上未见鞭毛出现,但在培养体系中可见次级精母细胞及精子细胞.结论 应用双室培养,生精细胞可存活达1月之久,而且部分生精细胞尾部出现鞭毛,从形态上发生了减数分裂及精子变态过程.
目的 建立生精細胞體外分化(如減數分裂、精子變態)培養體繫,為研究精子髮生中各種調控因素的作用提供一箇良好的細胞模型.方法 取20～22日齡的SD雄性大鼠睪汍,放在預冷的Hanks液中洗2次,用1 mg/mL膠原酶32 ℃消化15～20 min.然後將睪汍剪碎,重複用1 mg/mL膠原酶消化5～10 min.細胞用含10%胎牛血清及各種營養因子的HamF12/DMEM培養液懸浮,按約2×106 /cm2密度分彆接種于雙室培養槽(雙室培養)或放有蓋玻片的6孔闆(單室培養)中,在32 ℃、95%空氣、5%CO2條件下培養.每日在相差顯微鏡下觀察共培養支持細胞/生精細胞的生長狀態,定期進行囌木精-伊紅染色、BrdU染色.結果 在雙室培養2週後,部分生精細胞可見鞭毛齣現,培養4週後,培養體繫中仍有一定數量的生精細胞附著在支持細胞上,部分生精細胞上可見鞭毛.單室培養的生精細胞在培養第4～5天開始齣現明顯脫落,培養1週後大多數生精細胞髮生脫落死亡,生精細胞上未見鞭毛齣現,但在培養體繫中可見次級精母細胞及精子細胞.結論 應用雙室培養,生精細胞可存活達1月之久,而且部分生精細胞尾部齣現鞭毛,從形態上髮生瞭減數分裂及精子變態過程.
목적 건립생정세포체외분화(여감수분렬、정자변태)배양체계,위연구정자발생중각충조공인소적작용제공일개량호적세포모형.방법 취20～22일령적SD웅성대서고환,방재예랭적Hanks액중세2차,용1 mg/mL효원매32 ℃소화15～20 min.연후장고환전쇄,중복용1 mg/mL효원매소화5～10 min.세포용함10%태우혈청급각충영양인자적HamF12/DMEM배양액현부,안약2×106 /cm2밀도분별접충우쌍실배양조(쌍실배양)혹방유개파편적6공판(단실배양)중,재32 ℃、95%공기、5%CO2조건하배양.매일재상차현미경하관찰공배양지지세포/생정세포적생장상태,정기진행소목정-이홍염색、BrdU염색.결과 재쌍실배양2주후,부분생정세포가견편모출현,배양4주후,배양체계중잉유일정수량적생정세포부착재지지세포상,부분생정세포상가견편모.단실배양적생정세포재배양제4～5천개시출현명현탈락,배양1주후대다수생정세포발생탈락사망,생정세포상미견편모출현,단재배양체계중가견차급정모세포급정자세포.결론 응용쌍실배양,생정세포가존활체1월지구,이차부분생정세포미부출현편모,종형태상발생료감수분렬급정자변태과정.
