CAJ | 학술논문

乳酸球菌(Lactococcus lactis)是一种安全级微生物,为活载体疫苗传递抗原的理想选择.嗜水气单胞菌(A eromonas hydrophila,Ah)能引起鱼类等多种动物的败血病,因其血清型众多,寻找共同保护性抗原是进行疫苗研究的重点.为探究嗜水气单胞菌AS1.927株外膜蛋白(OMP)在乳酸乳球菌中的表达和检测其表达产物对小鼠的免疫保护效果,本研究将己克隆的ompA基因经BamH Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后连接载体pNZ8048,转化乳酸乳球菌NZ9000,nisin诱导表达,并进行SDS-PAGE分析鉴定.结果显示,重组基因工程菌L.lactis[pNZ-ompA]表达的融合蛋白分子量约为36.2 kD,成熟蛋白分子量约为33.7 kD.将重组基因工程菌L.lac tis [pNZ-ompA]口服免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),用放射免疫法检测末次免疫一周后的各组小鼠肠粘膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的水平以及用间接ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG,结果发现,该重组基因工程菌能显著提高sIgA的分泌(P＜0.05)；同时在小鼠血清中的特异性抗体含量也显著高于对照组(P＜0.05).末次免疫两周后用100 LD50的Ah AS 1.927(3.3×105 cfu/mL)腹腔注射攻击小鼠,口服重组菌对小鼠的相对免疫保护力(relative percent survival,RPS)为87.5％,表明重组基因工程菌可诱导小鼠对AhAS1.927产生一定的免疫保护作用.该结果将为开发安全有效的口服基因工程鱼用疫苗提供一定的实验基础.
유산구균(Lactococcus lactis)시일충안전급미생물,위활재체역묘전체항원적이상선택.기수기단포균(A eromonas hydrophila,Ah)능인기어류등다충동물적패혈병,인기혈청형음다,심조공동보호성항원시진행역묘연구적중점.위탐구기수기단포균AS1.927주외막단백(OMP)재유산유구균중적표체화검측기표체산물대소서적면역보호효과,본연구장기극륭적ompA기인경BamH Ⅰ화Xba Ⅰ쌍매절후련접재체pNZ8048,전화유산유구균NZ9000,nisin유도표체,병진행SDS-PAGE분석감정.결과현시,중조기인공정균L.lactis[pNZ-ompA]표체적융합단백분자량약위36.2 kD,성숙단백분자량약위33.7 kD.장중조기인공정균L.lac tis [pNZ-ompA]구복면역BALB/c소서(Mus musculus),용방사면역법검측말차면역일주후적각조소서장점막분비형면역구단백A(sIgA)적수평이급용간접ELISA법검측소서혈청특이성항체IgG,결과발현,해중조기인공정균능현저제고sIgA적분비(P＜0.05)；동시재소서혈청중적특이성항체함량야현저고우대조조(P＜0.05).말차면역량주후용100 LD50적Ah AS 1.927(3.3×105 cfu/mL)복강주사공격소서,구복중조균대소서적상대면역보호력(relative percent survival,RPS)위87.5％,표명중조기인공정균가유도소서대AhAS1.927산생일정적면역보호작용.해결과장위개발안전유효적구복기인공정어용역묘제공일정적실험기출.