CAJ | 학술논문

为了确定新城疫病毒融合蛋白(F)分子上活性位点中保守氨基酸在F蛋白的细胞融合作用,弄清F细胞融合的分子机理,采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用DNA序列分析进一步确定,并于真核细胞内进行表达,Giemsa染色定性和指示基因法定量检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测表达效率情况.结果表明, NDV F 第117位苯丙氨酸(F)突变成亮氨酸(L)时对细胞融合作用没有显著影响.R112和K115同为保守序列,分别突变为G时,细胞融合活性只有原来的44%,下降了56%.细胞表面表达效率没有明显的改变.N147突变为K时,细胞融合活性明显下降,只有原来的15%,而细胞表面表达效率没有明显的改变.L154为保守序列,突变为K时,细胞融合活性消失,说明L154是一个非常关键的氨基酸,对维持F蛋白的细胞融合活性非常重要.细胞表面表达效率也有所下降(为原来的94%).D462属于高度保守氨基酸,当突变为N时,细胞融合活性消失,但经细胞表面表达效率分析证明,此突变蛋白未表达于细胞表面,证明在细胞浆转运至细胞表面的过程中发生了问题.当突变为R和E时,细胞融合活性未发生改变,但细胞表面表达效率有所下降,分别为野毒株的63%和44%.说明 NDV F分子上与 HN相互作用的特异性区域中的某些保守氨基酸在细胞融合中发挥着重要作用,对F蛋白的折叠、加工、转运等,发挥着不同作用,从而影响F蛋白的细胞融合作用和/或在细胞表面的表达量.
위료학정신성역병독융합단백(F)분자상활성위점중보수안기산재F단백적세포융합작용,롱청F세포융합적분자궤리,채용기인정점돌변법,창조일개매절위점,용매절반응초보사선돌변주,연후용DNA서렬분석진일보학정,병우진핵세포내진행표체,Giemsa염색정성화지시기인법정량검측세포융합공능,형광강도분석(FACS)검측표체효솔정황.결과표명, NDV F 제117위분병안산(F)돌변성량안산(L)시대세포융합작용몰유현저영향.R112화K115동위보수서렬,분별돌변위G시,세포융합활성지유원래적44%,하강료56%.세포표면표체효솔몰유명현적개변.N147돌변위K시,세포융합활성명현하강,지유원래적15%,이세포표면표체효솔몰유명현적개변.L154위보수서렬,돌변위K시,세포융합활성소실,설명L154시일개비상관건적안기산,대유지F단백적세포융합활성비상중요.세포표면표체효솔야유소하강(위원래적94%).D462속우고도보수안기산,당돌변위N시,세포융합활성소실,단경세포표면표체효솔분석증명,차돌변단백미표체우세포표면,증명재세포장전운지세포표면적과정중발생료문제.당돌변위R화E시,세포융합활성미발생개변,단세포표면표체효솔유소하강,분별위야독주적63%화44%.설명 NDV F분자상여 HN상호작용적특이성구역중적모사보수안기산재세포융합중발휘착중요작용,대F단백적절첩、가공、전운등,발휘착불동작용,종이영향F단백적세포융합작용화/혹재세포표면적표체량.