中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2011年
2期
146-149
,共4页
李启明%马智静%张靖%靳玉琴%陈实%张学峰%刘梅影
李啟明%馬智靜%張靖%靳玉琴%陳實%張學峰%劉梅影
리계명%마지정%장정%근옥금%진실%장학봉%류매영
重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)%多糖结合疫苗%A、C群脑膜炎球菌多糖
重組大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(rLTB)%多糖結閤疫苗%A、C群腦膜炎毬菌多糖
중조대장간균불내열장독소B아단위(rLTB)%다당결합역묘%A、C군뇌막염구균다당
Recombinant Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit (rLTB)%Polysaccharide conjugate vaccine%Group A and C meningococcal polysaccharides
目的 比较和评价在A、C群脑膜炎球菌多糖结合物中应用两种蛋白作为载体的免疫效果.方法 构建不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的克隆载体和表达载体.确定rLTB主要为可溶性表达.应用一步阳离子交换层析对rLTB进行纯化,获得较纯的目的蛋白.利用GM1-ELISA和非变性SDS-PAGE的方法确定纯化后的rLTB能够形成具有生物学活性的五聚体.最后利用化学方法(ADH方法)将通过基因工程手段获得的重组LTB五聚体蛋白与C群脑膜炎球菌多糖(GCMP)耦联,获得多糖蛋白结合物GCMP-rLTB.以单一蛋白破伤风类毒素(TT)为载体的A+C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物(GAMP-TT和GCMP-TT)及同时应用两种蛋白载体的A+C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物(GAMP-TT和GCMP-rLTB)分别通过腹腔注射途径免疫小鼠.应用ELISA方法分别检测小鼠血清中IgG水平.结果 单独以TT为载体的A+C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物(GAMP-TT和GC-MP-TT)和同时以两种蛋白作为载体的A+C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物(GAMP-TT和GCMP-rLTB)通过注射途径免疫小鼠,后者产生的血清多糖特异性IgG水平显著高于前者.结论 双蛋白载体在改善A、C群脑膜炎球菌多糖结合物疫苗的免疫原性方面具有明显优势.
目的 比較和評價在A、C群腦膜炎毬菌多糖結閤物中應用兩種蛋白作為載體的免疫效果.方法 構建不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)的剋隆載體和錶達載體.確定rLTB主要為可溶性錶達.應用一步暘離子交換層析對rLTB進行純化,穫得較純的目的蛋白.利用GM1-ELISA和非變性SDS-PAGE的方法確定純化後的rLTB能夠形成具有生物學活性的五聚體.最後利用化學方法(ADH方法)將通過基因工程手段穫得的重組LTB五聚體蛋白與C群腦膜炎毬菌多糖(GCMP)耦聯,穫得多糖蛋白結閤物GCMP-rLTB.以單一蛋白破傷風類毒素(TT)為載體的A+C群腦膜炎毬菌多糖蛋白結閤物(GAMP-TT和GCMP-TT)及同時應用兩種蛋白載體的A+C群腦膜炎毬菌多糖蛋白結閤物(GAMP-TT和GCMP-rLTB)分彆通過腹腔註射途徑免疫小鼠.應用ELISA方法分彆檢測小鼠血清中IgG水平.結果 單獨以TT為載體的A+C群腦膜炎毬菌多糖蛋白結閤物(GAMP-TT和GC-MP-TT)和同時以兩種蛋白作為載體的A+C群腦膜炎毬菌多糖蛋白結閤物(GAMP-TT和GCMP-rLTB)通過註射途徑免疫小鼠,後者產生的血清多糖特異性IgG水平顯著高于前者.結論 雙蛋白載體在改善A、C群腦膜炎毬菌多糖結閤物疫苗的免疫原性方麵具有明顯優勢.
목적 비교화평개재A、C군뇌막염구균다당결합물중응용량충단백작위재체적면역효과.방법 구건불내열장독소B아단위(LTB)적극륭재체화표체재체.학정rLTB주요위가용성표체.응용일보양리자교환층석대rLTB진행순화,획득교순적목적단백.이용GM1-ELISA화비변성SDS-PAGE적방법학정순화후적rLTB능구형성구유생물학활성적오취체.최후이용화학방법(ADH방법)장통과기인공정수단획득적중조LTB오취체단백여C군뇌막염구균다당(GCMP)우련,획득다당단백결합물GCMP-rLTB.이단일단백파상풍류독소(TT)위재체적A+C군뇌막염구균다당단백결합물(GAMP-TT화GCMP-TT)급동시응용량충단백재체적A+C군뇌막염구균다당단백결합물(GAMP-TT화GCMP-rLTB)분별통과복강주사도경면역소서.응용ELISA방법분별검측소서혈청중IgG수평.결과 단독이TT위재체적A+C군뇌막염구균다당단백결합물(GAMP-TT화GC-MP-TT)화동시이량충단백작위재체적A+C군뇌막염구균다당단백결합물(GAMP-TT화GCMP-rLTB)통과주사도경면역소서,후자산생적혈청다당특이성IgG수평현저고우전자.결론 쌍단백재체재개선A、C군뇌막염구균다당결합물역묘적면역원성방면구유명현우세.
Objective To evaluate the immunogenicity of group A and C meningococcal polysaccharides conjugates using different proteins as carriers. Methods Heat-labile enterotoxin B subunit (LTB)pentamer form was expressed in E. coli. The target protein was identified and purified by cation-exchange chromatography. Then biological activity of rLTB was tested using GM1-ELISA. GCMP was conjugated to rLTB with the chemical method (ADH). Furthermore, the mice were immunized with GAMp-TT/GCMP-TT conjugates and GAMP-TT/GCMP-rLTB conjugates via peritoneal. Finally the anti-polysaccharide antibody was detected. Results The GAMP-TT/GCMP-rLTB conjugate elicits remarkably higher serum antibodies in mice than GAMP-TT/GCMP-TT conjugate. Conclusion These results indicated that polysaccharide conjugates using different proteins as carriers were superior to those using only one protein as carrier.
