中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2002年
4期
415-418
,共4页
关德玉%何长清%武英%黄敦武%路立业%刘碧坚
關德玉%何長清%武英%黃敦武%路立業%劉碧堅
관덕옥%하장청%무영%황돈무%로립업%류벽견
丙型肝炎病毒%核心蛋白%RNA结合活性
丙型肝炎病毒%覈心蛋白%RNA結閤活性
병형간염병독%핵심단백%RNA결합활성
目的对丙型肝炎病毒核心蛋白的RNA结合区进行详细定位,为制备缺失RNA结合活性突变体做准备. 方法构建GST融合丙型肝炎病毒核心蛋白不同区域片段表达质粒,在大肠杆菌中表达相应蛋白并用glutathione sepharose 4B进行纯化,利用二次电泳法检测RNA的结合活性,利用时相差电泳法比较不同区域RNA结合活性的强弱. 结果核心蛋白第1～132位氨基酸(AA)之间的片段得到了良好的表达和纯化, 表达的蛋白经Western blot得到确认.二次电泳后的放射自显影结果显示,第1～10 AA、19～45 AA、80～132 AA片段无RNA结合活性, 而含有10～16 AA,45～80 AA的片段可结合单链和双链RNA.1～29 AA与38～90 AA 2个片段对RNA的结合强度基本相同. 结论丙型肝炎核心蛋白中存在2个RNA结合区,分别定位于10～16 AA及45～80 AA.2个结合区都具有较强的RNA结合活性.制备RNA结合活性缺陷突变体须同时对2个结合区进行突变.
目的對丙型肝炎病毒覈心蛋白的RNA結閤區進行詳細定位,為製備缺失RNA結閤活性突變體做準備. 方法構建GST融閤丙型肝炎病毒覈心蛋白不同區域片段錶達質粒,在大腸桿菌中錶達相應蛋白併用glutathione sepharose 4B進行純化,利用二次電泳法檢測RNA的結閤活性,利用時相差電泳法比較不同區域RNA結閤活性的彊弱. 結果覈心蛋白第1～132位氨基痠(AA)之間的片段得到瞭良好的錶達和純化, 錶達的蛋白經Western blot得到確認.二次電泳後的放射自顯影結果顯示,第1～10 AA、19～45 AA、80～132 AA片段無RNA結閤活性, 而含有10～16 AA,45～80 AA的片段可結閤單鏈和雙鏈RNA.1～29 AA與38～90 AA 2箇片段對RNA的結閤彊度基本相同. 結論丙型肝炎覈心蛋白中存在2箇RNA結閤區,分彆定位于10～16 AA及45～80 AA.2箇結閤區都具有較彊的RNA結閤活性.製備RNA結閤活性缺陷突變體鬚同時對2箇結閤區進行突變.
목적대병형간염병독핵심단백적RNA결합구진행상세정위,위제비결실RNA결합활성돌변체주준비. 방법구건GST융합병형간염병독핵심단백불동구역편단표체질립,재대장간균중표체상응단백병용glutathione sepharose 4B진행순화,이용이차전영법검측RNA적결합활성,이용시상차전영법비교불동구역RNA결합활성적강약. 결과핵심단백제1～132위안기산(AA)지간적편단득도료량호적표체화순화, 표체적단백경Western blot득도학인.이차전영후적방사자현영결과현시,제1～10 AA、19～45 AA、80～132 AA편단무RNA결합활성, 이함유10～16 AA,45～80 AA적편단가결합단련화쌍련RNA.1～29 AA여38～90 AA 2개편단대RNA적결합강도기본상동. 결론병형간염핵심단백중존재2개RNA결합구,분별정위우10～16 AA급45～80 AA.2개결합구도구유교강적RNA결합활성.제비RNA결합활성결함돌변체수동시대2개결합구진행돌변.
