中华口腔医学杂志
中華口腔醫學雜誌
중화구강의학잡지
Chinese Journal of Stomatology
2008年
2期
113-117
,共5页
于利洁%王洁%董福生%石宏%李荷香%顾洪涛
于利潔%王潔%董福生%石宏%李荷香%顧洪濤
우리길%왕길%동복생%석굉%리하향%고홍도
基因,ras%癌,腺样囊性%质粒%RNA干扰
基因,ras%癌,腺樣囊性%質粒%RNA榦擾
기인,ras%암,선양낭성%질립%RNA간우
目的 探讨H-ras基因对涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)生物学特性的影响以及作为SACC基因治疗靶点的可行性.方法 构建H-ras靶向H-ras-shRNA质粒及阴性对照HK-shRNA质粒,经脂质体介导转染SACC-M细胞,G418筛选建立稳定转染细胞株,将细胞分为H-ras-shRNA转染组、HK-shRNA转染组及未转染细胞组.绘制细胞生长曲线检测细胞体外增殖能力;反转录聚合酶链法分析各组细胞中H-ras基因mRNA表达变化;荧光蛋白定量分析H-ras蛋白表达水平;流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡情况;裸鼠成瘤实验检测细胞在体内的成瘤能力,分析H-ras沉默对细胞增殖及凋亡的影响.结果 成功构建重组质粒并导入SACC-M细胞,建立稳定表达质粒的细胞株.H-ras-shRNA质粒能有效降低SACC-M细胞中H-ras表达,H-ras基因抑制率为61.80%,H-ras蛋白表达抑制率为62.76%.细胞增殖活性明显受抑,G0G1期比例增加;流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率为30.82%,显著高于阴性对照组及空白对照组的4.29%和4.16%.H-ras沉默细胞的裸鼠体内成瘤能力降低.结论 H-ras靶向shRNA干扰质粒能持续有效的抑制SACC-M细胞中H-ras基因及蛋白水平的表达,降低细胞体内外的增殖活性,并能有效诱导细胞凋亡.
目的 探討H-ras基因對涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)生物學特性的影響以及作為SACC基因治療靶點的可行性.方法 構建H-ras靶嚮H-ras-shRNA質粒及陰性對照HK-shRNA質粒,經脂質體介導轉染SACC-M細胞,G418篩選建立穩定轉染細胞株,將細胞分為H-ras-shRNA轉染組、HK-shRNA轉染組及未轉染細胞組.繪製細胞生長麯線檢測細胞體外增殖能力;反轉錄聚閤酶鏈法分析各組細胞中H-ras基因mRNA錶達變化;熒光蛋白定量分析H-ras蛋白錶達水平;流式細胞術測定細胞週期及細胞凋亡情況;裸鼠成瘤實驗檢測細胞在體內的成瘤能力,分析H-ras沉默對細胞增殖及凋亡的影響.結果 成功構建重組質粒併導入SACC-M細胞,建立穩定錶達質粒的細胞株.H-ras-shRNA質粒能有效降低SACC-M細胞中H-ras錶達,H-ras基因抑製率為61.80%,H-ras蛋白錶達抑製率為62.76%.細胞增殖活性明顯受抑,G0G1期比例增加;流式細胞術結果顯示實驗組細胞凋亡率為30.82%,顯著高于陰性對照組及空白對照組的4.29%和4.16%.H-ras沉默細胞的裸鼠體內成瘤能力降低.結論 H-ras靶嚮shRNA榦擾質粒能持續有效的抑製SACC-M細胞中H-ras基因及蛋白水平的錶達,降低細胞體內外的增殖活性,併能有效誘導細胞凋亡.
목적 탐토H-ras기인대연선선양낭성암(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)생물학특성적영향이급작위SACC기인치료파점적가행성.방법 구건H-ras파향H-ras-shRNA질립급음성대조HK-shRNA질립,경지질체개도전염SACC-M세포,G418사선건립은정전염세포주,장세포분위H-ras-shRNA전염조、HK-shRNA전염조급미전염세포조.회제세포생장곡선검측세포체외증식능력;반전록취합매련법분석각조세포중H-ras기인mRNA표체변화;형광단백정량분석H-ras단백표체수평;류식세포술측정세포주기급세포조망정황;라서성류실험검측세포재체내적성류능력,분석H-ras침묵대세포증식급조망적영향.결과 성공구건중조질립병도입SACC-M세포,건립은정표체질립적세포주.H-ras-shRNA질립능유효강저SACC-M세포중H-ras표체,H-ras기인억제솔위61.80%,H-ras단백표체억제솔위62.76%.세포증식활성명현수억,G0G1기비례증가;류식세포술결과현시실험조세포조망솔위30.82%,현저고우음성대조조급공백대조조적4.29%화4.16%.H-ras침묵세포적라서체내성류능력강저.결론 H-ras파향shRNA간우질립능지속유효적억제SACC-M세포중H-ras기인급단백수평적표체,강저세포체내외적증식활성,병능유효유도세포조망.
