CAJ | 학술논문

目的:观察FTY720对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后神经功能的影响,并探讨其相关机制.方法:168只雌性SD大鼠,随机分成A、B、C三组,每组56只,A组(假手术组)大鼠麻醉后仅切除T9椎板,不打击脊髓,缝合后立即以0.3ml生理盐水灌胃.B、C组采用Allen's法制作T9脊髓损伤模型,B组(对照组)以0.3ml生理盐水灌胃,C组(治疗组)以FTY720按3mg/kg生理盐水稀释至0.3ml灌胃.每组取8只大鼠分别于术后1d、3d、7d、14d、21d行斜板试验及BBB评分.分别于术后6h、12h、24h、48h、72h、7d、21d处死大鼠,每个时间点每组8只,取损伤段(A组取相应部位)脊髓行超薄切片,HE染色观察各组脊髓坏死情况、炎细胞浸润情况、胶质瘢痕形成情况及脊髓空洞大小,并计数各组术后12h淋巴细胞数、术后12h与72h炎性细胞、术后7d胶质瘢痕区细胞,计算伤后21d脊髓空洞面积与脊髓面积比值；取术后6h、12h、24h、72h的切片行SP免疫组化染色观察caspase-3表达及Tunel染色观察细胞凋亡情况,计算相应时间点免疫组化染色阳性细胞比值和凋亡指数.所有数据以SPSS 13.0进行统计学分析.结果:B、C两组各时间点斜板实验及BBB评分均较A组同时间点差(P＜0.05),在术后1d时B、C组之间无显著性差异(P＞0.05),术后3d、7d、14d、21d时C组优于B组(P＜0.05).HE染色结果显示A组各时间点脊髓形态正常;B、C组脊髓术后6h可见脊髓内出血、血肿形成,术后12h～48h脊髓进行性水肿、损伤中心区出现液化坏死,伴有炎细胞浸润,以中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞为主,至术后72h,损伤中心区形成无组织结构空洞,空洞周围有大量炎细胞浸润,以小胶质细胞/单核细胞为主；术后12h及72h,B组炎细胞浸润程度明显重于C组(P＜0.05),术后12h C组淋巴细胞浸润程度相对B组明显减少(P＜0.05),术后7d,脊髓水肿减轻,空洞周围形成胶质瘢痕,胶质瘢痕细胞计数B组明显大于C组(P＜0.05),术后21d脊髓空洞形成,脊髓空洞比值B组明显大于C组(P＜0.05).SP免疫组化染色和Tunel染色结果显示A组各时间点几乎见不到caspase-3和细胞凋亡表达阳性细胞,B、C组脊髓损术后6h即可见凋亡细胞,到术后24h达高峰,而后随术后时间延长而逐渐减弱,但是仍然保持在较高水平；caspase-3表达与细胞凋亡同步,各时间点C组caspase-3表达阳性细胞比值和细胞凋亡指数均显著低于B组(P＜0.05).结论:FTY720 可以显著改善大鼠ASCI后神下功能,其可能是通过抑制脊髓损伤后的炎症反应,减少caspase-3的表达及神经细胞凋亡,从而减轻脊髓继发性损伤. 目的:觀察FTY720對大鼠急性脊髓損傷(ASCI)後神經功能的影響,併探討其相關機製.方法:168隻雌性SD大鼠,隨機分成A、B、C三組,每組56隻,A組(假手術組)大鼠痳醉後僅切除T9椎闆,不打擊脊髓,縫閤後立即以0.3ml生理鹽水灌胃.B、C組採用Allen's法製作T9脊髓損傷模型,B組(對照組)以0.3ml生理鹽水灌胃,C組(治療組)以FTY720按3mg/kg生理鹽水稀釋至0.3ml灌胃.每組取8隻大鼠分彆于術後1d、3d、7d、14d、21d行斜闆試驗及BBB評分.分彆于術後6h、12h、24h、48h、72h、7d、21d處死大鼠,每箇時間點每組8隻,取損傷段(A組取相應部位)脊髓行超薄切片,HE染色觀察各組脊髓壞死情況、炎細胞浸潤情況、膠質瘢痕形成情況及脊髓空洞大小,併計數各組術後12h淋巴細胞數、術後12h與72h炎性細胞、術後7d膠質瘢痕區細胞,計算傷後21d脊髓空洞麵積與脊髓麵積比值；取術後6h、12h、24h、72h的切片行SP免疫組化染色觀察caspase-3錶達及Tunel染色觀察細胞凋亡情況,計算相應時間點免疫組化染色暘性細胞比值和凋亡指數.所有數據以SPSS 13.0進行統計學分析.結果:B、C兩組各時間點斜闆實驗及BBB評分均較A組同時間點差(P＜0.05),在術後1d時B、C組之間無顯著性差異(P＞0.05),術後3d、7d、14d、21d時C組優于B組(P＜0.05).HE染色結果顯示A組各時間點脊髓形態正常;B、C組脊髓術後6h可見脊髓內齣血、血腫形成,術後12h～48h脊髓進行性水腫、損傷中心區齣現液化壞死,伴有炎細胞浸潤,以中性粒細胞、淋巴細胞、單覈細胞為主,至術後72h,損傷中心區形成無組織結構空洞,空洞週圍有大量炎細胞浸潤,以小膠質細胞/單覈細胞為主；術後12h及72h,B組炎細胞浸潤程度明顯重于C組(P＜0.05),術後12h C組淋巴細胞浸潤程度相對B組明顯減少(P＜0.05),術後7d,脊髓水腫減輕,空洞週圍形成膠質瘢痕,膠質瘢痕細胞計數B組明顯大于C組(P＜0.05),術後21d脊髓空洞形成,脊髓空洞比值B組明顯大于C組(P＜0.05).SP免疫組化染色和Tunel染色結果顯示A組各時間點幾乎見不到caspase-3和細胞凋亡錶達暘性細胞,B、C組脊髓損術後6h即可見凋亡細胞,到術後24h達高峰,而後隨術後時間延長而逐漸減弱,但是仍然保持在較高水平；caspase-3錶達與細胞凋亡同步,各時間點C組caspase-3錶達暘性細胞比值和細胞凋亡指數均顯著低于B組(P＜0.05).結論:FTY720 可以顯著改善大鼠ASCI後神下功能,其可能是通過抑製脊髓損傷後的炎癥反應,減少caspase-3的錶達及神經細胞凋亡,從而減輕脊髓繼髮性損傷.
목적:관찰FTY720대대서급성척수손상(ASCI)후신경공능적영향,병탐토기상관궤제.방법:168지자성SD대서,수궤분성A、B、C삼조,매조56지,A조(가수술조)대서마취후부절제T9추판,불타격척수,봉합후립즉이0.3ml생리염수관위.B、C조채용Allen's법제작T9척수손상모형,B조(대조조)이0.3ml생리염수관위,C조(치료조)이FTY720안3mg/kg생리염수희석지0.3ml관위.매조취8지대서분별우술후1d、3d、7d、14d、21d행사판시험급BBB평분.분별우술후6h、12h、24h、48h、72h、7d、21d처사대서,매개시간점매조8지,취손상단(A조취상응부위)척수행초박절편,HE염색관찰각조척수배사정황、염세포침윤정황、효질반흔형성정황급척수공동대소,병계수각조술후12h림파세포수、술후12h여72h염성세포、술후7d효질반흔구세포,계산상후21d척수공동면적여척수면적비치；취술후6h、12h、24h、72h적절편행SP면역조화염색관찰caspase-3표체급Tunel염색관찰세포조망정황,계산상응시간점면역조화염색양성세포비치화조망지수.소유수거이SPSS 13.0진행통계학분석.결과:B、C량조각시간점사판실험급BBB평분균교A조동시간점차(P＜0.05),재술후1d시B、C조지간무현저성차이(P＞0.05),술후3d、7d、14d、21d시C조우우B조(P＜0.05).HE염색결과현시A조각시간점척수형태정상;B、C조척수술후6h가견척수내출혈、혈종형성,술후12h～48h척수진행성수종、손상중심구출현액화배사,반유염세포침윤,이중성립세포、림파세포、단핵세포위주,지술후72h,손상중심구형성무조직결구공동,공동주위유대량염세포침윤,이소효질세포/단핵세포위주；술후12h급72h,B조염세포침윤정도명현중우C조(P＜0.05),술후12h C조림파세포침윤정도상대B조명현감소(P＜0.05),술후7d,척수수종감경,공동주위형성효질반흔,효질반흔세포계수B조명현대우C조(P＜0.05),술후21d척수공동형성,척수공동비치B조명현대우C조(P＜0.05).SP면역조화염색화Tunel염색결과현시A조각시간점궤호견불도caspase-3화세포조망표체양성세포,B、C조척수손술후6h즉가견조망세포,도술후24h체고봉,이후수술후시간연장이축점감약,단시잉연보지재교고수평；caspase-3표체여세포조망동보,각시간점C조caspase-3표체양성세포비치화세포조망지수균현저저우B조(P＜0.05).결론:FTY720 가이현저개선대서ASCI후신하공능,기가능시통과억제척수손상후적염증반응,감소caspase-3적표체급신경세포조망,종이감경척수계발성손상.