CAJ | 학술논문

旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响.以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a.采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于HEK 293细胞株中进行病毒的包装、扩繁.TCI50法测定病毒滴度.qRT-PCR检测miR-200a及16个乳脂合成相关基因mRNA表达水平.序列分析结果显示,pri-miR-200a包括pre-miR-200a 86 bp和侧翼序列共297 bp.酶切结果证实pAd-pri-miR-200a构建成功.Ad-pri-miR-200a滴度达8×109 PFU· mL-1.实时定量结果表明,Ad-pri-miR-200a(MOI为200)感染奶山羊乳腺上皮细胞72 h,miR-200a的表达量较对照高出2.4倍.同时miR-200a的过表达引起10个基因mRNA表达量下调,6个基因mRNA表达量上调.其中脂肪酸从头合成相关基因FASN、脂滴生成相关基因TIP47及脂肪酸运输相关基因FABP4降幅较大,分别下降了0.47、0.89及0.65倍.而TAG生成相关基因DGAT1和脂解相关基因HSL较对照分别增加了0.52和1.49倍.本研究获得的重组腺病毒Ad-pri-miR-200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,同时miR-200a过表达影响乳脂合成相关基因mRNA表达水平.
지재구건pAd-pri-miR-200a중조선병독,사기재내산양유선상피세포중은정표체miR-200a,연구miR-200a대유지합성상관기인mRNA표체적영향.이서농살능양DNA위모판확증pri-miR-200a.채용Ad-Easy계통구건중조선병독재체pAd-pri-miR-200a,병우HEK 293세포주중진행병독적포장、확번.TCI50법측정병독적도.qRT-PCR검측miR-200a급16개유지합성상관기인mRNA표체수평.서렬분석결과현시,pri-miR-200a포괄pre-miR-200a 86 bp화측익서렬공297 bp.매절결과증실pAd-pri-miR-200a구건성공.Ad-pri-miR-200a적도체8×109 PFU· mL-1.실시정량결과표명,Ad-pri-miR-200a(MOI위200)감염내산양유선상피세포72 h,miR-200a적표체량교대조고출2.4배.동시miR-200a적과표체인기10개기인mRNA표체량하조,6개기인mRNA표체량상조.기중지방산종두합성상관기인FASN、지적생성상관기인TIP47급지방산운수상관기인FABP4강폭교대,분별하강료0.47、0.89급0.65배.이TAG생성상관기인DGAT1화지해상관기인HSL교대조분별증가료0.52화1.49배.본연구획득적중조선병독Ad-pri-miR-200a능재산양유선상피세포중은정표체miR-200a,동시miR-200a과표체영향유지합성상관기인mRNA표체수평.