基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2012年
3期
240-248
,共9页
李阿英%刘洪%李晓颖%郭磊%宋长年
李阿英%劉洪%李曉穎%郭磊%宋長年
리아영%류홍%리효영%곽뢰%송장년
枳%Pt-SCL6和Pt-GRAS%基因克隆%亚细胞定位
枳%Pt-SCL6和Pt-GRAS%基因剋隆%亞細胞定位
지%Pt-SCL6화Pt-GRAS%기인극륭%아세포정위
利用生物信息学方法以拟南芥SCL6和杨树GRAS cDNA 序列作为模板,对柑橘EST数据库进行同源检索筛选出柑橘SCL6和GRAS基因的cDNA序列,并以枳[Poncirus trifoliata (L.) Raf.]花cDNA为模板,根据以上cDNA序列设计5'末端和3'末端扩增的特异引物,利用5' RACE和3' RACE技术,分别获得该基因的5'和3'末端,序列拼接后获得枳的SCL6和GRAS cDNA全长.分别命名Pt-SCL6和Pt-GRAS,大小分别是2 668 bp 和1 911 bp,在GenBank的登录号分别是GQ505957和GU072592,其分别编码706个和636个氨基酸全长.生物信息学分析表明Pt-SCL6和Pt-GRAS的cDNA序列中分别有microRNA171 (miR171) 和miR1446的识别位点,其与其它植物的GRAS一样有着高度保守的序列即GRAS结构域.构建Pt-SCL6和Pt-GRAS亚细胞定位载体35S-GW-GFP-GQ505957/GU072592,基因枪转化洋葱表皮细胞,暗培养24 h后激光共聚焦显微镜下观察.亚细胞定位结果表明Pt-SCL6和Pt-GRAS均定位于细胞膜中.转录因子Pt-SCL6和Pt-GRAS表现出在细胞膜区域定位的现象.
利用生物信息學方法以擬南芥SCL6和楊樹GRAS cDNA 序列作為模闆,對柑橘EST數據庫進行同源檢索篩選齣柑橘SCL6和GRAS基因的cDNA序列,併以枳[Poncirus trifoliata (L.) Raf.]花cDNA為模闆,根據以上cDNA序列設計5'末耑和3'末耑擴增的特異引物,利用5' RACE和3' RACE技術,分彆穫得該基因的5'和3'末耑,序列拼接後穫得枳的SCL6和GRAS cDNA全長.分彆命名Pt-SCL6和Pt-GRAS,大小分彆是2 668 bp 和1 911 bp,在GenBank的登錄號分彆是GQ505957和GU072592,其分彆編碼706箇和636箇氨基痠全長.生物信息學分析錶明Pt-SCL6和Pt-GRAS的cDNA序列中分彆有microRNA171 (miR171) 和miR1446的識彆位點,其與其它植物的GRAS一樣有著高度保守的序列即GRAS結構域.構建Pt-SCL6和Pt-GRAS亞細胞定位載體35S-GW-GFP-GQ505957/GU072592,基因鎗轉化洋蔥錶皮細胞,暗培養24 h後激光共聚焦顯微鏡下觀察.亞細胞定位結果錶明Pt-SCL6和Pt-GRAS均定位于細胞膜中.轉錄因子Pt-SCL6和Pt-GRAS錶現齣在細胞膜區域定位的現象.
이용생물신식학방법이의남개SCL6화양수GRAS cDNA 서렬작위모판,대감귤EST수거고진행동원검색사선출감귤SCL6화GRAS기인적cDNA서렬,병이지[Poncirus trifoliata (L.) Raf.]화cDNA위모판,근거이상cDNA서렬설계5'말단화3'말단확증적특이인물,이용5' RACE화3' RACE기술,분별획득해기인적5'화3'말단,서렬병접후획득지적SCL6화GRAS cDNA전장.분별명명Pt-SCL6화Pt-GRAS,대소분별시2 668 bp 화1 911 bp,재GenBank적등록호분별시GQ505957화GU072592,기분별편마706개화636개안기산전장.생물신식학분석표명Pt-SCL6화Pt-GRAS적cDNA서렬중분별유microRNA171 (miR171) 화miR1446적식별위점,기여기타식물적GRAS일양유착고도보수적서렬즉GRAS결구역.구건Pt-SCL6화Pt-GRAS아세포정위재체35S-GW-GFP-GQ505957/GU072592,기인창전화양총표피세포,암배양24 h후격광공취초현미경하관찰.아세포정위결과표명Pt-SCL6화Pt-GRAS균정위우세포막중.전록인자Pt-SCL6화Pt-GRAS표현출재세포막구역정위적현상.
