中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2012年
2期
38-42
,共5页
刘巧荣%孙明%乔明明%杨璐%申屠芬琴%马永缨%曹振%田克恭%陈西钊
劉巧榮%孫明%喬明明%楊璐%申屠芬琴%馬永纓%曹振%田剋恭%陳西釗
류교영%손명%교명명%양로%신도분금%마영영%조진%전극공%진서쇠
牛γ干扰素%原核表达%抗原性%大肠杆菌
牛γ榦擾素%原覈錶達%抗原性%大腸桿菌
우γ간우소%원핵표체%항원성%대장간균
目的 在大肠杆菌中高效表达牛γ-干扰素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ),并对其生物活性进行初步鉴定.方法 依据GenBank上基因序列人工合成BovIFN-γ基因,PCR方法扩增该基因,将其插入PET-28a载体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21中,在IPTG诱导下表达BovIFN-γ,并进行Western blot鉴定.Ni-NTA亲和层析法和电洗脱方法纯化表达的重组蛋白,用Western blot和商品化的BovIFN-γ检测试剂盒进行重组蛋白的抗原性检测.结果 成功构建了BovIFN-γ原核表达载体PET-28a- BIFN-γ,并在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的32％,表达产物主要以可溶性形式存在于菌体裂解液上清中；重组蛋白可与BovIFN-γ单克隆抗体反应,Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白抗原活性比电洗脱方法纯化的抗原活性高.结论 在大肠杆菌中成功表达了可溶性的BovIFN-γ蛋白,可与BovIFN-γ单抗发生反应,纯化的重组蛋白具有良好的反应原性.
目的 在大腸桿菌中高效錶達牛γ-榦擾素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ),併對其生物活性進行初步鑒定.方法 依據GenBank上基因序列人工閤成BovIFN-γ基因,PCR方法擴增該基因,將其插入PET-28a載體構建原覈錶達質粒,轉化大腸桿菌BL21中,在IPTG誘導下錶達BovIFN-γ,併進行Western blot鑒定.Ni-NTA親和層析法和電洗脫方法純化錶達的重組蛋白,用Western blot和商品化的BovIFN-γ檢測試劑盒進行重組蛋白的抗原性檢測.結果 成功構建瞭BovIFN-γ原覈錶達載體PET-28a- BIFN-γ,併在大腸桿菌中高效錶達,錶達蛋白約佔菌體總蛋白的32％,錶達產物主要以可溶性形式存在于菌體裂解液上清中；重組蛋白可與BovIFN-γ單剋隆抗體反應,Ni-NTA親和層析法純化的重組蛋白抗原活性比電洗脫方法純化的抗原活性高.結論 在大腸桿菌中成功錶達瞭可溶性的BovIFN-γ蛋白,可與BovIFN-γ單抗髮生反應,純化的重組蛋白具有良好的反應原性.
목적 재대장간균중고효표체우γ-간우소(bovine interferon-γ,BovIFN-γ),병대기생물활성진행초보감정.방법 의거GenBank상기인서렬인공합성BovIFN-γ기인,PCR방법확증해기인,장기삽입PET-28a재체구건원핵표체질립,전화대장간균BL21중,재IPTG유도하표체BovIFN-γ,병진행Western blot감정.Ni-NTA친화층석법화전세탈방법순화표체적중조단백,용Western blot화상품화적BovIFN-γ검측시제합진행중조단백적항원성검측.결과 성공구건료BovIFN-γ원핵표체재체PET-28a- BIFN-γ,병재대장간균중고효표체,표체단백약점균체총단백적32％,표체산물주요이가용성형식존재우균체렬해액상청중；중조단백가여BovIFN-γ단극륭항체반응,Ni-NTA친화층석법순화적중조단백항원활성비전세탈방법순화적항원활성고.결론 재대장간균중성공표체료가용성적BovIFN-γ단백,가여BovIFN-γ단항발생반응,순화적중조단백구유량호적반응원성.
