生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
437-440
,共4页
刘娟%赵兴卉%蒋世卫%朱旭东%黄培堂
劉娟%趙興卉%蔣世衛%硃旭東%黃培堂
류연%조흥훼%장세위%주욱동%황배당
锌指%HIV-1%包涵体%Biacore 3000%CM-5芯片
鋅指%HIV-1%包涵體%Biacore 3000%CM-5芯片
자지%HIV-1%포함체%Biacore 3000%CM-5심편
目的:为了更好地利用Biacore 3000研究锌指与核酸的相互作用,将特异性识别HIV-1 5'端一段保守序列的三锌指蛋白固定在CM-5芯片上.方法:将特异性识别HIV-1 5'端一段保守序列5'-CTGTGTTTG-3'的三锌指基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达重组三锌指蛋白,超声碎菌进行SDS-PAGE分析;包涵体形式的表达产物用盐酸胍溶解后,经一步凝胶柱复性并纯化;随后摸索适宜固定的pH值并通过化学方法进行固定.结果:表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化及柱复性后的蛋白纯度为98.8%,并在CM-5芯片上成功固定.结论:本研究为利用Biacore实时定量研究锌指蛋白与其识别DNA的相互作用进行了尝试.
目的:為瞭更好地利用Biacore 3000研究鋅指與覈痠的相互作用,將特異性識彆HIV-1 5'耑一段保守序列的三鋅指蛋白固定在CM-5芯片上.方法:將特異性識彆HIV-1 5'耑一段保守序列5'-CTGTGTTTG-3'的三鋅指基因剋隆到錶達載體pET-22b(+)中,轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株,經IPTG誘導錶達重組三鋅指蛋白,超聲碎菌進行SDS-PAGE分析;包涵體形式的錶達產物用鹽痠胍溶解後,經一步凝膠柱複性併純化;隨後摸索適宜固定的pH值併通過化學方法進行固定.結果:錶達的重組蛋白主要以包涵體形式存在于超聲沉澱中,純化及柱複性後的蛋白純度為98.8%,併在CM-5芯片上成功固定.結論:本研究為利用Biacore實時定量研究鋅指蛋白與其識彆DNA的相互作用進行瞭嘗試.
목적:위료경호지이용Biacore 3000연구자지여핵산적상호작용,장특이성식별HIV-1 5'단일단보수서렬적삼자지단백고정재CM-5심편상.방법:장특이성식별HIV-1 5'단일단보수서렬5'-CTGTGTTTG-3'적삼자지기인극륭도표체재체pET-22b(+)중,전화대장간균BL21(DE3)균주,경IPTG유도표체중조삼자지단백,초성쇄균진행SDS-PAGE분석;포함체형식적표체산물용염산고용해후,경일보응효주복성병순화;수후모색괄의고정적pH치병통과화학방법진행고정.결과:표체적중조단백주요이포함체형식존재우초성침정중,순화급주복성후적단백순도위98.8%,병재CM-5심편상성공고정.결론:본연구위이용Biacore실시정량연구자지단백여기식별DNA적상호작용진행료상시.
