细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
7期
649-651,656
,共4页
赵清涛%马龙洋%薛国柱%赵爱志%窦科峰
趙清濤%馬龍洋%薛國柱%趙愛誌%竇科峰
조청도%마룡양%설국주%조애지%두과봉
肝癌%单链抗体%表达%生物活性
肝癌%單鏈抗體%錶達%生物活性
간암%단련항체%표체%생물활성
目的:在大肠杆菌中表达人源性肝癌单链抗体(scFv), 并分析他的结合活性.方法:应用噬菌体表面呈现技术获得人源性肝癌scFv, 利用重叠延伸PCR将VL和VH基因以(Gly4ser)3 linker连接成单链, 插入表达载体pET28a(+), 诱导目的蛋白表达, 对包涵体进行溶解、复性、纯化, 得到可溶性目的蛋白, 应用非竞争细胞ELISA检测与肝癌细胞结合的特异性及结合能力.结果:在A600为0.8时开始诱导, 持续6 h, 目的蛋白表达量占菌体总蛋白的26%, 包涵体经过复性纯化后, 得到纯度达到95%的重组scFv, 其亲和常数为:3.6×107 mol/L.结论:实现了人源性肝癌scFv的蛋白表达, 抗体蛋白与肝癌细胞具有较强的特异性结合能力, 为今后进行免疫学检测和开发肿瘤靶向治疗提供了研究手段.
目的:在大腸桿菌中錶達人源性肝癌單鏈抗體(scFv), 併分析他的結閤活性.方法:應用噬菌體錶麵呈現技術穫得人源性肝癌scFv, 利用重疊延伸PCR將VL和VH基因以(Gly4ser)3 linker連接成單鏈, 插入錶達載體pET28a(+), 誘導目的蛋白錶達, 對包涵體進行溶解、複性、純化, 得到可溶性目的蛋白, 應用非競爭細胞ELISA檢測與肝癌細胞結閤的特異性及結閤能力.結果:在A600為0.8時開始誘導, 持續6 h, 目的蛋白錶達量佔菌體總蛋白的26%, 包涵體經過複性純化後, 得到純度達到95%的重組scFv, 其親和常數為:3.6×107 mol/L.結論:實現瞭人源性肝癌scFv的蛋白錶達, 抗體蛋白與肝癌細胞具有較彊的特異性結閤能力, 為今後進行免疫學檢測和開髮腫瘤靶嚮治療提供瞭研究手段.
목적:재대장간균중표체인원성간암단련항체(scFv), 병분석타적결합활성.방법:응용서균체표면정현기술획득인원성간암scFv, 이용중첩연신PCR장VL화VH기인이(Gly4ser)3 linker련접성단련, 삽입표체재체pET28a(+), 유도목적단백표체, 대포함체진행용해、복성、순화, 득도가용성목적단백, 응용비경쟁세포ELISA검측여간암세포결합적특이성급결합능력.결과:재A600위0.8시개시유도, 지속6 h, 목적단백표체량점균체총단백적26%, 포함체경과복성순화후, 득도순도체도95%적중조scFv, 기친화상수위:3.6×107 mol/L.결론:실현료인원성간암scFv적단백표체, 항체단백여간암세포구유교강적특이성결합능력, 위금후진행면역학검측화개발종류파향치료제공료연구수단.
