CAJ | 학술논문

为研究小鼠胚胎干细胞(ESC)定向诱导分化为造血干细胞( HSC)在体内重建造血的功能,将小鼠El4ESC诱导为拟胚体(EB),EB细胞利用Transwell非接触共培养体系在人主动脉-性腺-中肾(AGM)区、胎肝(FL)及骨髓(BM)基质细胞饲养层上依次诱导,收获各阶段EB细胞,以流式细胞仪检测Sca-1+ c-Kit+细胞含量,并接种于NOD-SCID小鼠以检测体内致瘤性.再将不同诱导阶段的EB来源细胞移植到J经致死量60Coγ射线照射的BALB/c雌鼠,将受鼠随机分为5组:①AGM组,②AGM+ FL组,③AGM+ FL+ BM组,④照射对照组,⑤正常对照组.观察各组生存率、造血重建和植入状况.结果显示:EB细胞经人AGM区和FL基质细胞共培养后Sca-1+ c-Kit+细胞达到峰值(21.96±2.54)％；NOD-SCID小鼠在接种经人AGM区基质细胞诱导的EB细胞后可出现畸胎瘤,而接种经人AGM区+FL基质细胞诱导EB细胞后未见肿瘤形成；AGM组及照射对照组动物全部死亡,而AGM+FL组及AGM+FL+BM组生存率分别为77.8％、66.7％,移植后21天外周血象基本恢复,在存活受鼠检测到供体来源Sry基因.结论:按胚胎造血发育程序,体外经人AGM区、FL及BM基质细胞连续诱导小鼠ESC分化的HSC可安全、有效地重建体内造血.
위연구소서배태간세포(ESC)정향유도분화위조혈간세포( HSC)재체내중건조혈적공능,장소서El4ESC유도위의배체(EB),EB세포이용Transwell비접촉공배양체계재인주동맥-성선-중신(AGM)구、태간(FL)급골수(BM)기질세포사양층상의차유도,수획각계단EB세포,이류식세포의검측Sca-1+ c-Kit+세포함량,병접충우NOD-SCID소서이검측체내치류성.재장불동유도계단적EB래원세포이식도J경치사량60Coγ사선조사적BALB/c자서,장수서수궤분위5조:①AGM조,②AGM+ FL조,③AGM+ FL+ BM조,④조사대조조,⑤정상대조조.관찰각조생존솔、조혈중건화식입상황.결과현시:EB세포경인AGM구화FL기질세포공배양후Sca-1+ c-Kit+세포체도봉치(21.96±2.54)％；NOD-SCID소서재접충경인AGM구기질세포유도적EB세포후가출현기태류,이접충경인AGM구+FL기질세포유도EB세포후미견종류형성；AGM조급조사대조조동물전부사망,이AGM+FL조급AGM+FL+BM조생존솔분별위77.8％、66.7％,이식후21천외주혈상기본회복,재존활수서검측도공체래원Sry기인.결론:안배태조혈발육정서,체외경인AGM구、FL급BM기질세포련속유도소서ESC분화적HSC가안전、유효지중건체내조혈.