农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
513-520
,共8页
李曼%宋勤叶%李艳琴%左玉柱%李潭清
李曼%宋勤葉%李豔琴%左玉柱%李潭清
리만%송근협%리염금%좌옥주%리담청
PCV2%siRNA%表达质粒%抑制作用%负相关
PCV2%siRNA%錶達質粒%抑製作用%負相關
PCV2%siRNA%표체질립%억제작용%부상관
猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的必要病原,对养猪生产构成了严重威胁,但当前缺乏有效的防治手段.为了探索治疗PCVAD的新途径,分别针对PCV2的病毒复制相关蛋白基因(rep)与衣壳蛋白基因(cap),构建了PCV2特异的siRNA表达质粒(pGensil-R259、pGensil-C297和pGensilC490)和PCV2非特异的阴性对照质粒(pGensiI-SCR).在脂质体介导下,将构建的siRNA表达质粒与阴性对照质粒转染PK-15细胞,转染质粒20 h后感染PCV2.结果质粒表达的特异siRNA抑制了PCV2 DNA的合成及Rep和Cap蛋白的表达,使病毒滴度(TCID50)显著下降;针对靶基因不同位点的siRNA的抑制效果不同,病毒感染后36 h内,siRNA对PCV2的抑制作用最强,随后有所下降,但直至感染后60 h仍然能够显著抑制PCV2复制.实验结果提示质粒表达的特异siRNA能够显著地抑制PCV2的增殖,但这种抑制功能与作用时间呈负相关.
豬圓環病毒2型(PCV2)是豬圓環病毒相關疾病(PCVAD)的必要病原,對養豬生產構成瞭嚴重威脅,但噹前缺乏有效的防治手段.為瞭探索治療PCVAD的新途徑,分彆針對PCV2的病毒複製相關蛋白基因(rep)與衣殼蛋白基因(cap),構建瞭PCV2特異的siRNA錶達質粒(pGensil-R259、pGensil-C297和pGensilC490)和PCV2非特異的陰性對照質粒(pGensiI-SCR).在脂質體介導下,將構建的siRNA錶達質粒與陰性對照質粒轉染PK-15細胞,轉染質粒20 h後感染PCV2.結果質粒錶達的特異siRNA抑製瞭PCV2 DNA的閤成及Rep和Cap蛋白的錶達,使病毒滴度(TCID50)顯著下降;針對靶基因不同位點的siRNA的抑製效果不同,病毒感染後36 h內,siRNA對PCV2的抑製作用最彊,隨後有所下降,但直至感染後60 h仍然能夠顯著抑製PCV2複製.實驗結果提示質粒錶達的特異siRNA能夠顯著地抑製PCV2的增殖,但這種抑製功能與作用時間呈負相關.
저원배병독2형(PCV2)시저원배병독상관질병(PCVAD)적필요병원,대양저생산구성료엄중위협,단당전결핍유효적방치수단.위료탐색치료PCVAD적신도경,분별침대PCV2적병독복제상관단백기인(rep)여의각단백기인(cap),구건료PCV2특이적siRNA표체질립(pGensil-R259、pGensil-C297화pGensilC490)화PCV2비특이적음성대조질립(pGensiI-SCR).재지질체개도하,장구건적siRNA표체질립여음성대조질립전염PK-15세포,전염질립20 h후감염PCV2.결과질립표체적특이siRNA억제료PCV2 DNA적합성급Rep화Cap단백적표체,사병독적도(TCID50)현저하강;침대파기인불동위점적siRNA적억제효과불동,병독감염후36 h내,siRNA대PCV2적억제작용최강,수후유소하강,단직지감염후60 h잉연능구현저억제PCV2복제.실험결과제시질립표체적특이siRNA능구현저지억제PCV2적증식,단저충억제공능여작용시간정부상관.
