中国现代医学杂志
中國現代醫學雜誌
중국현대의학잡지
CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE
2008年
2期
171-173
,共3页
hTERT%绿色荧光表达载体%真核表达
hTERT%綠色熒光錶達載體%真覈錶達
hTERT%록색형광표체재체%진핵표체
目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒.方法 用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,再将重组的pEGFP-C3-hTERT基因片段转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光倒置显微镜观察并检测转染细胞的hTERT mRNA表达水平.结果 DNA序列分析证实了重组载体pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT内插入片段的碱基组成与公开发表的hTERT序列一致.转染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3细胞可见绿色荧光,并检出高水平表达的hTERT.结论 成功构建高效表达hTERT的真核表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤治疗打下实验基础.
目的 構建人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)片段的真覈錶達質粒.方法 用RT-PCR方法從肝癌組織中提取總RNA擴增齣hTERT基因片段,將其連接pGEM-TEasy質粒上,將重組質粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真覈綠色熒光蛋白錶達載體同時用HindⅢ和BamHⅠ雙酶切後進行連接,再將重組的pEGFP-C3-hTERT基因片段轉染NIH3T3細胞,經G418篩選穫得穩定轉染的細胞繫,熒光倒置顯微鏡觀察併檢測轉染細胞的hTERT mRNA錶達水平.結果 DNA序列分析證實瞭重組載體pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT內插入片段的堿基組成與公開髮錶的hTERT序列一緻.轉染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3細胞可見綠色熒光,併檢齣高水平錶達的hTERT.結論 成功構建高效錶達hTERT的真覈錶達載體,為以hTERT為靶點的腫瘤治療打下實驗基礎.
목적 구건인단립매역전록매(hTERT)편단적진핵표체질립.방법 용RT-PCR방법종간암조직중제취총RNA확증출hTERT기인편단,장기련접pGEM-TEasy질립상,장중조질립pGEM-T-hTERT화pEGFP-C3진핵록색형광단백표체재체동시용HindⅢ화BamHⅠ쌍매절후진행련접,재장중조적pEGFP-C3-hTERT기인편단전염NIH3T3세포,경G418사선획득은정전염적세포계,형광도치현미경관찰병검측전염세포적hTERT mRNA표체수평.결과 DNA서렬분석증실료중조재체pGEM-T-hTERT화pEGFP-C3-hTERT내삽입편단적감기조성여공개발표적hTERT서렬일치.전염pEGFP-C3-hTERT적NIH3T3세포가견록색형광,병검출고수평표체적hTERT.결론 성공구건고효표체hTERT적진핵표체재체,위이hTERT위파점적종류치료타하실험기출.
