广西医科大学学报
廣西醫科大學學報
엄서의과대학학보
JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY
2011年
2期
169-173
,共5页
韦庆军%陆定贵%赵劲民%韦积华%肖仕辉%李伟岸
韋慶軍%陸定貴%趙勁民%韋積華%肖仕輝%李偉岸
위경군%륙정귀%조경민%위적화%초사휘%리위안
骨髓间充质干细胞%分离%培养%诱导%5-溴脱氧尿嘧啶核苷%四甲基偶氮唑盐
骨髓間充質榦細胞%分離%培養%誘導%5-溴脫氧尿嘧啶覈苷%四甲基偶氮唑鹽
골수간충질간세포%분리%배양%유도%5-추탈양뇨밀정핵감%사갑기우담서염
目的:拟在体外建立一种分离纯化、培养扩增、标记兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法.方法:密度梯度离心和贴壁培养相结合,台盼蓝染色观察离心后细胞活性,绘制BMSCs生长曲线,流式细胞仪检测BMSCs表面标记.诱导传代细胞向成软骨细胞分化,2周后免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达和阿尔新蓝染色检测蛋白多糖的表达.BrdU标记BMSCs,观察最佳标记率及标记时间,并予四甲基偶氮唑盐方法测定标记后细胞活性.结果:密度梯度离心结合贴壁法能分离培养出纯度较高的BMSCs,分离后细胞活性均大于99%,BMSCs表面标记CD90、CD45、CD34阳性细胞表达分别为99.24%、0.03%、1.37%,BMSCs的生长曲线呈S形.成软骨诱导2周后Ⅱ型胶原免疫组化阳性,阿尔新蓝染色细胞基质被蓝染.BrdU标记后,MSCs标记率>95%,BrdU细胞标记最佳时间为48 h,最佳浓度为10 mg/L,标记后细胞活性高.结论:采用密度梯度离心和贴壁培养相结合,可获得纯度较高BMSCs;BrdU是一种简单、有效的标记BMSCs的方法,BrdU对细胞标记率高.
目的:擬在體外建立一種分離純化、培養擴增、標記兔骨髓間充質榦細胞(BMSCs)的方法.方法:密度梯度離心和貼壁培養相結閤,檯盼藍染色觀察離心後細胞活性,繪製BMSCs生長麯線,流式細胞儀檢測BMSCs錶麵標記.誘導傳代細胞嚮成軟骨細胞分化,2週後免疫組化檢測Ⅱ型膠原的錶達和阿爾新藍染色檢測蛋白多糖的錶達.BrdU標記BMSCs,觀察最佳標記率及標記時間,併予四甲基偶氮唑鹽方法測定標記後細胞活性.結果:密度梯度離心結閤貼壁法能分離培養齣純度較高的BMSCs,分離後細胞活性均大于99%,BMSCs錶麵標記CD90、CD45、CD34暘性細胞錶達分彆為99.24%、0.03%、1.37%,BMSCs的生長麯線呈S形.成軟骨誘導2週後Ⅱ型膠原免疫組化暘性,阿爾新藍染色細胞基質被藍染.BrdU標記後,MSCs標記率>95%,BrdU細胞標記最佳時間為48 h,最佳濃度為10 mg/L,標記後細胞活性高.結論:採用密度梯度離心和貼壁培養相結閤,可穫得純度較高BMSCs;BrdU是一種簡單、有效的標記BMSCs的方法,BrdU對細胞標記率高.
목적:의재체외건립일충분리순화、배양확증、표기토골수간충질간세포(BMSCs)적방법.방법:밀도제도리심화첩벽배양상결합,태반람염색관찰리심후세포활성,회제BMSCs생장곡선,류식세포의검측BMSCs표면표기.유도전대세포향성연골세포분화,2주후면역조화검측Ⅱ형효원적표체화아이신람염색검측단백다당적표체.BrdU표기BMSCs,관찰최가표기솔급표기시간,병여사갑기우담서염방법측정표기후세포활성.결과:밀도제도리심결합첩벽법능분리배양출순도교고적BMSCs,분리후세포활성균대우99%,BMSCs표면표기CD90、CD45、CD34양성세포표체분별위99.24%、0.03%、1.37%,BMSCs적생장곡선정S형.성연골유도2주후Ⅱ형효원면역조화양성,아이신람염색세포기질피람염.BrdU표기후,MSCs표기솔>95%,BrdU세포표기최가시간위48 h,최가농도위10 mg/L,표기후세포활성고.결론:채용밀도제도리심화첩벽배양상결합,가획득순도교고BMSCs;BrdU시일충간단、유효적표기BMSCs적방법,BrdU대세포표기솔고.
