基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2010年
5期
982-986
,共5页
寇洪超%王翠花%孙玉文%徐文玲%牟晋华
寇洪超%王翠花%孫玉文%徐文玲%牟晉華
구홍초%왕취화%손옥문%서문령%모진화
大白菜%软腐病%BrWRKY33%植物表达载体
大白菜%軟腐病%BrWRKY33%植物錶達載體
대백채%연부병%BrWRKY33%식물표체재체
利用农杆菌侵染法获得抗软腐病转BrWRKY33基因大白菜,首先要构建植物表达载体.本实验根据BrWRKY33基因的序列及pROK2表达载体的酶切位点设计引物(FN/RN),获得BrWRKY33基因,然后将该基因连接到克隆载体pGEM-T Easy,重新构建了克隆载体T-WRKY.经测序及酶切验证,选取PCR反应中错配率最低的产物,构建了表达载体PROK2-WRKY,并将该表达载体转入到根癌农杆菌EHA105中,并对其转化子进行了鉴定.结果表明,PCR扩增获得目的基因BrW RKY33全长约1443bp,PCR及酶切结果鉴定表明克隆载体T-WRKY已经重新构建成功.表达载体的PCR及BamH I和KpnI双酶切鉴定表明有4个重组子表现阳性,表明目的基因已经插入到pROK2表达载体,表达载体构建成功.PCR鉴定表明表达载体pROK2-WRKY已经转入根癌农杆菌EHA105中.本实验结果将为进一步研究大白菜抗软腐病基因的转化奠定基础.
利用農桿菌侵染法穫得抗軟腐病轉BrWRKY33基因大白菜,首先要構建植物錶達載體.本實驗根據BrWRKY33基因的序列及pROK2錶達載體的酶切位點設計引物(FN/RN),穫得BrWRKY33基因,然後將該基因連接到剋隆載體pGEM-T Easy,重新構建瞭剋隆載體T-WRKY.經測序及酶切驗證,選取PCR反應中錯配率最低的產物,構建瞭錶達載體PROK2-WRKY,併將該錶達載體轉入到根癌農桿菌EHA105中,併對其轉化子進行瞭鑒定.結果錶明,PCR擴增穫得目的基因BrW RKY33全長約1443bp,PCR及酶切結果鑒定錶明剋隆載體T-WRKY已經重新構建成功.錶達載體的PCR及BamH I和KpnI雙酶切鑒定錶明有4箇重組子錶現暘性,錶明目的基因已經插入到pROK2錶達載體,錶達載體構建成功.PCR鑒定錶明錶達載體pROK2-WRKY已經轉入根癌農桿菌EHA105中.本實驗結果將為進一步研究大白菜抗軟腐病基因的轉化奠定基礎.
이용농간균침염법획득항연부병전BrWRKY33기인대백채,수선요구건식물표체재체.본실험근거BrWRKY33기인적서렬급pROK2표체재체적매절위점설계인물(FN/RN),획득BrWRKY33기인,연후장해기인련접도극륭재체pGEM-T Easy,중신구건료극륭재체T-WRKY.경측서급매절험증,선취PCR반응중착배솔최저적산물,구건료표체재체PROK2-WRKY,병장해표체재체전입도근암농간균EHA105중,병대기전화자진행료감정.결과표명,PCR확증획득목적기인BrW RKY33전장약1443bp,PCR급매절결과감정표명극륭재체T-WRKY이경중신구건성공.표체재체적PCR급BamH I화KpnI쌍매절감정표명유4개중조자표현양성,표명목적기인이경삽입도pROK2표체재체,표체재체구건성공.PCR감정표명표체재체pROK2-WRKY이경전입근암농간균EHA105중.본실험결과장위진일보연구대백채항연부병기인적전화전정기출.
