农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
681-686
,共6页
陈建秋%潘大仁%周以飞%卢文标%程晓春%王占成%陈雅艳%林钿
陳建鞦%潘大仁%週以飛%盧文標%程曉春%王佔成%陳雅豔%林鈿
진건추%반대인%주이비%로문표%정효춘%왕점성%진아염%림전
睾丸酮丛毛单胞菌%teiR%ELISA%3a-HSD/CR
睪汍酮叢毛單胞菌%teiR%ELISA%3a-HSD/CR
고환동총모단포균%teiR%ELISA%3a-HSD/CR
提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)基因组DNA,利用PCR扩增teiR基因,将扩增产物克隆到pKtac2(含强启动子tac)和pK18中,构建重组质粒pKtac2-teiR和pKteiR100.将重组质粒分别转化大肠杆菌(Escherichia coli)HB101,提取细菌总蛋白,ELISA测定细菌总蛋白中TeiR蛋白的表达量,结果表明:含如tac强启动子的pKtac2-teiR转化大肠杆菌后,TeiR蛋白的表达量可以达到6.65 μg/mg,比pKteiR100的表达量高出0.72μg/mg.将p6(含3a-HSD/CR基因)分别和重组质粒(pKtac2-teiR和pKteiR100)共转化大肠杆菌HB101,测定细菌总蛋白中3a-HSD/CR和TeiR的表达量,结果表明:在大肠杆菌中teiR基因可以明显促进3a-HSD/CR基因的表达,pKtac2-teiR与p6共转化大肠杆菌后teiR基因的表达量比pKteiR100与p6共转化后teiR基因的表达量高,其TeiR蛋白表达量分别为5.94和5.33 μg/mg;添加终浓度1 mmol/L,的IPTG诱导,其TeiR蛋白的表达量分别为6.81和6.10 μg/mg.但是pKtac2-teiR与p6共转化后的3a-HSD/CR的表达量低于pKteiR100与p6共转化后的3a-HSD/CR的表达量,未添加IPTG诱导,3a-HSD/CR的蛋白表达量依次为1.20和1.71 μg/mg;添加终浓度为1mmol/L IPTG诱导,其3a-HSD/CR的蛋白表达量依次为1.42和1.80 μg/mg.
提取睪汍酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni)基因組DNA,利用PCR擴增teiR基因,將擴增產物剋隆到pKtac2(含彊啟動子tac)和pK18中,構建重組質粒pKtac2-teiR和pKteiR100.將重組質粒分彆轉化大腸桿菌(Escherichia coli)HB101,提取細菌總蛋白,ELISA測定細菌總蛋白中TeiR蛋白的錶達量,結果錶明:含如tac彊啟動子的pKtac2-teiR轉化大腸桿菌後,TeiR蛋白的錶達量可以達到6.65 μg/mg,比pKteiR100的錶達量高齣0.72μg/mg.將p6(含3a-HSD/CR基因)分彆和重組質粒(pKtac2-teiR和pKteiR100)共轉化大腸桿菌HB101,測定細菌總蛋白中3a-HSD/CR和TeiR的錶達量,結果錶明:在大腸桿菌中teiR基因可以明顯促進3a-HSD/CR基因的錶達,pKtac2-teiR與p6共轉化大腸桿菌後teiR基因的錶達量比pKteiR100與p6共轉化後teiR基因的錶達量高,其TeiR蛋白錶達量分彆為5.94和5.33 μg/mg;添加終濃度1 mmol/L,的IPTG誘導,其TeiR蛋白的錶達量分彆為6.81和6.10 μg/mg.但是pKtac2-teiR與p6共轉化後的3a-HSD/CR的錶達量低于pKteiR100與p6共轉化後的3a-HSD/CR的錶達量,未添加IPTG誘導,3a-HSD/CR的蛋白錶達量依次為1.20和1.71 μg/mg;添加終濃度為1mmol/L IPTG誘導,其3a-HSD/CR的蛋白錶達量依次為1.42和1.80 μg/mg.
제취고환동총모단포균(Comamonas testosteroni)기인조DNA,이용PCR확증teiR기인,장확증산물극륭도pKtac2(함강계동자tac)화pK18중,구건중조질립pKtac2-teiR화pKteiR100.장중조질립분별전화대장간균(Escherichia coli)HB101,제취세균총단백,ELISA측정세균총단백중TeiR단백적표체량,결과표명:함여tac강계동자적pKtac2-teiR전화대장간균후,TeiR단백적표체량가이체도6.65 μg/mg,비pKteiR100적표체량고출0.72μg/mg.장p6(함3a-HSD/CR기인)분별화중조질립(pKtac2-teiR화pKteiR100)공전화대장간균HB101,측정세균총단백중3a-HSD/CR화TeiR적표체량,결과표명:재대장간균중teiR기인가이명현촉진3a-HSD/CR기인적표체,pKtac2-teiR여p6공전화대장간균후teiR기인적표체량비pKteiR100여p6공전화후teiR기인적표체량고,기TeiR단백표체량분별위5.94화5.33 μg/mg;첨가종농도1 mmol/L,적IPTG유도,기TeiR단백적표체량분별위6.81화6.10 μg/mg.단시pKtac2-teiR여p6공전화후적3a-HSD/CR적표체량저우pKteiR100여p6공전화후적3a-HSD/CR적표체량,미첨가IPTG유도,3a-HSD/CR적단백표체량의차위1.20화1.71 μg/mg;첨가종농도위1mmol/L IPTG유도,기3a-HSD/CR적단백표체량의차위1.42화1.80 μg/mg.
