北华大学学报（自然科学版）
北華大學學報（自然科學版）
북화대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF BEIHUA UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2009年
4期
314-318
,共5页
张雷%王尔孚%倪红霞%张媛%陈立梅
張雷%王爾孚%倪紅霞%張媛%陳立梅
장뢰%왕이부%예홍하%장원%진립매
小鼠脑%14-3-3蛋白质%原核表达载体%基因重组蛋白
小鼠腦%14-3-3蛋白質%原覈錶達載體%基因重組蛋白
소서뇌%14-3-3단백질%원핵표체재체%기인중조단백
目的 克隆编码14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,制备该蛋白质的基因重组蛋白质.方法 参照小鼠14-3-3蛋白质θ亚型mRNA结构设计引物,以小鼠脑总RNA为模板,RT-PCR法克隆编码14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,插入原核表达质粒pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)使其表达谷胱甘肽S转移酶(GST)为标签的融合蛋白质,以凝血酶定点分解融合蛋白并采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化目的 蛋白.结果 RT-PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离可见约800 bp条带,序列分析表明重组质粒pGEX-1433theta中的插入子为738 bp,编码245个氨基酸,其核苷酸及氨基酸序列与Pubmed NM-011739展示的结果一致.重组质粒pGEX-1433theta在BL21(DE3)中的表达量随IPTG诱导时间递增,融合蛋白质为可溶性组分.亲和层析纯化的14-3-3theta在SDS-PAGE上表现为单一条带,表观相对分子质量为30 ku.每L培养菌液可收获4mg基因重组型小鼠14-3-3theta.结论 克隆了编码小鼠14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,制备了高纯度基因重组型小鼠14-3-3theta,为进行单克隆抗体的制备奠定了坚实的基础.
目的 剋隆編碼14-3-3蛋白質θ亞型的cDNA,製備該蛋白質的基因重組蛋白質.方法 參照小鼠14-3-3蛋白質θ亞型mRNA結構設計引物,以小鼠腦總RNA為模闆,RT-PCR法剋隆編碼14-3-3蛋白質θ亞型的cDNA,插入原覈錶達質粒pGEX-4T-1,轉化大腸桿菌BL21(DE3)使其錶達穀胱甘肽S轉移酶(GST)為標籤的融閤蛋白質,以凝血酶定點分解融閤蛋白併採用Glutathione Sepharose 4B親和層析純化目的 蛋白.結果 RT-PCR擴增產物經1%瓊脂糖凝膠電泳分離可見約800 bp條帶,序列分析錶明重組質粒pGEX-1433theta中的插入子為738 bp,編碼245箇氨基痠,其覈苷痠及氨基痠序列與Pubmed NM-011739展示的結果一緻.重組質粒pGEX-1433theta在BL21(DE3)中的錶達量隨IPTG誘導時間遞增,融閤蛋白質為可溶性組分.親和層析純化的14-3-3theta在SDS-PAGE上錶現為單一條帶,錶觀相對分子質量為30 ku.每L培養菌液可收穫4mg基因重組型小鼠14-3-3theta.結論 剋隆瞭編碼小鼠14-3-3蛋白質θ亞型的cDNA,製備瞭高純度基因重組型小鼠14-3-3theta,為進行單剋隆抗體的製備奠定瞭堅實的基礎.
목적 극륭편마14-3-3단백질θ아형적cDNA,제비해단백질적기인중조단백질.방법 삼조소서14-3-3단백질θ아형mRNA결구설계인물,이소서뇌총RNA위모판,RT-PCR법극륭편마14-3-3단백질θ아형적cDNA,삽입원핵표체질립pGEX-4T-1,전화대장간균BL21(DE3)사기표체곡광감태S전이매(GST)위표첨적융합단백질,이응혈매정점분해융합단백병채용Glutathione Sepharose 4B친화층석순화목적 단백.결과 RT-PCR확증산물경1%경지당응효전영분리가견약800 bp조대,서렬분석표명중조질립pGEX-1433theta중적삽입자위738 bp,편마245개안기산,기핵감산급안기산서렬여Pubmed NM-011739전시적결과일치.중조질립pGEX-1433theta재BL21(DE3)중적표체량수IPTG유도시간체증,융합단백질위가용성조분.친화층석순화적14-3-3theta재SDS-PAGE상표현위단일조대,표관상대분자질량위30 ku.매L배양균액가수획4mg기인중조형소서14-3-3theta.결론 극륭료편마소서14-3-3단백질θ아형적cDNA,제비료고순도기인중조형소서14-3-3theta,위진행단극륭항체적제비전정료견실적기출.
