中国分子心脏病学杂志
中國分子心髒病學雜誌
중국분자심장병학잡지
MOLECULAR CARDIOLOGY OF CHINA
2009年
1期
16-18
,共3页
刘瑜%王宣春%陈凤玲%李春霖%胡仁明
劉瑜%王宣春%陳鳳玲%李春霖%鬍仁明
류유%왕선춘%진봉령%리춘림%호인명
BTBD10%真核表达%转染
BTBD10%真覈錶達%轉染
BTBD10%진핵표체%전염
目的 构建BTBD10重组真核表达载体,观察BTBD10在HEK293细胞中的定位.方法 利用PCR方法扩增BTBD10全长,经HindIII和BamHI酶切后连接入pGFP-C3真核表达载体,构建pGFP-C3-BTBD10重组表达质粒,转染HEK293细胞,利用激光共聚焦显微镜观察BTBD10在细胞中的定位.结果 经双酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的BTBD10读码框.激光共聚焦显微镜观察到空质粒pGFP-C3转染后,整个细胞内弥散绿色荧光,而转染pGFP-C3-BTBD10重组载体后,可见绿色荧光分布于HEK293细胞膜一侧的细胞浆中,提示BTBD10定位于细胞浆中.结论 成功构建人BTBD10真核表达载体,BTBD10定位于哺乳细胞的细胞浆中,可能发挥蛋白之间的相互作用.
目的 構建BTBD10重組真覈錶達載體,觀察BTBD10在HEK293細胞中的定位.方法 利用PCR方法擴增BTBD10全長,經HindIII和BamHI酶切後連接入pGFP-C3真覈錶達載體,構建pGFP-C3-BTBD10重組錶達質粒,轉染HEK293細胞,利用激光共聚焦顯微鏡觀察BTBD10在細胞中的定位.結果 經雙酶切和覈痠序列分析證實重組質粒包含有正確編碼的BTBD10讀碼框.激光共聚焦顯微鏡觀察到空質粒pGFP-C3轉染後,整箇細胞內瀰散綠色熒光,而轉染pGFP-C3-BTBD10重組載體後,可見綠色熒光分佈于HEK293細胞膜一側的細胞漿中,提示BTBD10定位于細胞漿中.結論 成功構建人BTBD10真覈錶達載體,BTBD10定位于哺乳細胞的細胞漿中,可能髮揮蛋白之間的相互作用.
목적 구건BTBD10중조진핵표체재체,관찰BTBD10재HEK293세포중적정위.방법 이용PCR방법확증BTBD10전장,경HindIII화BamHI매절후련접입pGFP-C3진핵표체재체,구건pGFP-C3-BTBD10중조표체질립,전염HEK293세포,이용격광공취초현미경관찰BTBD10재세포중적정위.결과 경쌍매절화핵산서렬분석증실중조질립포함유정학편마적BTBD10독마광.격광공취초현미경관찰도공질립pGFP-C3전염후,정개세포내미산록색형광,이전염pGFP-C3-BTBD10중조재체후,가견록색형광분포우HEK293세포막일측적세포장중,제시BTBD10정위우세포장중.결론 성공구건인BTBD10진핵표체재체,BTBD10정위우포유세포적세포장중,가능발휘단백지간적상호작용.
