中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
12期
1047-1050,1053
,共5页
李静%俞永新%安琪%杨力宏%孔艳
李靜%俞永新%安琪%楊力宏%孔豔
리정%유영신%안기%양력굉%공염
乙型脑炎病毒%全长cDNA%长链PCR%融合PCR
乙型腦炎病毒%全長cDNA%長鏈PCR%融閤PCR
을형뇌염병독%전장cDNA%장련PCR%융합PCR
目的 以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组.方法 根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEV SA14-14-2株的5'和3'半长分子,在5'端上游引物中引入T7启动子核心序列.利用细胞培养增殖病毒,提取病毒RNA,逆转录后采用Long PCR方法得到JEV的5'和3'两个半长分子,在此基础上进行融合PCR,得到JEV全长cDNA分子,克隆入pGEM T-easy载体,酶切鉴定并测序.结果 扩增出均6 000 bp的JEV的5'和3'两个半长分子及约11 000 bp的全长cDNA片段,其二级结构丰富的非编码区未发生缺失.JEV全长cDNA分子与GenBank中收录的相关毒株的的核苷酸序列同源性最高达99%,其氨基酸序列同源性最高达96.3%.其E蛋白基因与野毒株和减毒株进行比较,核苷酸序列同源性高达98%～99%,氨基酸序列也未出现较大差异.结论 已获得了乙型脑炎病毒SA14-14-2株全长基因组,为进一步构建感染性克隆奠定了基础.
目的 以長鏈PCR(Long-PCR)技術為基礎,應用融閤PCR方法擴增乙型腦炎病毒(JEV)全長基因組.方法 根據GenBank中收錄的JEV全長基因組序列設計引物,分彆擴增JEV SA14-14-2株的5'和3'半長分子,在5'耑上遊引物中引入T7啟動子覈心序列.利用細胞培養增殖病毒,提取病毒RNA,逆轉錄後採用Long PCR方法得到JEV的5'和3'兩箇半長分子,在此基礎上進行融閤PCR,得到JEV全長cDNA分子,剋隆入pGEM T-easy載體,酶切鑒定併測序.結果 擴增齣均6 000 bp的JEV的5'和3'兩箇半長分子及約11 000 bp的全長cDNA片段,其二級結構豐富的非編碼區未髮生缺失.JEV全長cDNA分子與GenBank中收錄的相關毒株的的覈苷痠序列同源性最高達99%,其氨基痠序列同源性最高達96.3%.其E蛋白基因與野毒株和減毒株進行比較,覈苷痠序列同源性高達98%～99%,氨基痠序列也未齣現較大差異.結論 已穫得瞭乙型腦炎病毒SA14-14-2株全長基因組,為進一步構建感染性剋隆奠定瞭基礎.
목적 이장련PCR(Long-PCR)기술위기출,응용융합PCR방법확증을형뇌염병독(JEV)전장기인조.방법 근거GenBank중수록적JEV전장기인조서렬설계인물,분별확증JEV SA14-14-2주적5'화3'반장분자,재5'단상유인물중인입T7계동자핵심서렬.이용세포배양증식병독,제취병독RNA,역전록후채용Long PCR방법득도JEV적5'화3'량개반장분자,재차기출상진행융합PCR,득도JEV전장cDNA분자,극륭입pGEM T-easy재체,매절감정병측서.결과 확증출균6 000 bp적JEV적5'화3'량개반장분자급약11 000 bp적전장cDNA편단,기이급결구봉부적비편마구미발생결실.JEV전장cDNA분자여GenBank중수록적상관독주적적핵감산서렬동원성최고체99%,기안기산서렬동원성최고체96.3%.기E단백기인여야독주화감독주진행비교,핵감산서렬동원성고체98%～99%,안기산서렬야미출현교대차이.결론 이획득료을형뇌염병독SA14-14-2주전장기인조,위진일보구건감염성극륭전정료기출.
