CAJ | 학술논문

背景:与较为成功的羊等大型动物宫内移植方法相比,利用小鼠等小型动物宫内移植异种造血干细胞仍面临困境,在外周血内检测到的异种血液细胞重建率仍在1%以下.目的:观察小鼠卵黄囊移植入脐血来源CD34+ 造血干细胞后的异种造血重建效率,并与腹腔移植的效果进行比较.设计、时间及地点:细胞学体内移植实验,于2007-10在北京大学十细胞与再牛牛物学实验室完成.材料:健康新生儿脐血取自北京海淀区妇幼保健院.ICR小鼠由北京大学医学部实验动物中心提供,孕8.5 d鼠8只,孕12.5 d鼠9只.藻红蛋白标记的抗人CD45单克隆抗体与流式细胞仪均为BD公司产品.方法:采用Ficoll 法梯度离心获得人脐血单个核细胞,经磁珠分选系统纯化获得CD34+ 细胞.将孕8.5 d鼠麻醉后,打开腹腔并暴露子宫,显微镜下抽取5～10 μL脐血CD34+ 细胞(5×104个),缓慢注入胎鼠的卵黄囊中.相同操作条件下将等量脐血CD34+ 细胞注射到孕12.5 d胎鼠的腹腔中.快速抽针,将孕鼠子宫归位并缝合腹腔,继续妊娠,等待分娩.待小鼠出牛后3个月,经尾静脉取血,在避光状态下加入藻红蛋白标记的抗人CD45单克隆荧光抗体,流式细胞仪检测血细胞表面标记CD45的表达,通过其阳性率判断人血液细胞在小鼠体内的重建效果.主要观察指标:不同移植方式对小鼠造血重建的影响.结果:CD34+ 细胞通过卵黄囊移植方式共获得健康出生小鼠52只,3个月后86.5%(45152)小鼠CIM5争阳性表达.嵌合率高达4.34%.通过腹腔移植方式共获得健康出生小鼠48只,3个月后81.3%(39/48)小鼠CD45呈阳性表达,明显低于卵黄囊移植方式(t=2.363,P＜0.05).结论:早期卵黄囊移植町以获得人造血干细胞在小鼠体内的长期重建,效果优于腹腔移植,同时也证明了通过胎鼠卵黄囊移植人脐血造血干细胞取得人源化造血系统小鼠模型的可行性.
배경:여교위성공적양등대형동물궁내이식방법상비,이용소서등소형동물궁내이식이충조혈간세포잉면림곤경,재외주혈내검측도적이충혈액세포중건솔잉재1%이하.목적:관찰소서란황낭이식입제혈래원CD34+ 조혈간세포후적이충조혈중건효솔,병여복강이식적효과진행비교.설계、시간급지점:세포학체내이식실험,우2007-10재북경대학십세포여재우우물학실험실완성.재료:건강신생인제혈취자북경해정구부유보건원.ICR소서유북경대학의학부실험동물중심제공,잉8.5 d서8지,잉12.5 d서9지.조홍단백표기적항인CD45단극륭항체여류식세포의균위BD공사산품.방법:채용Ficoll 법제도리심획득인제혈단개핵세포,경자주분선계통순화획득CD34+ 세포.장잉8.5 d서마취후,타개복강병폭로자궁,현미경하추취5～10 μL제혈CD34+ 세포(5×104개),완만주입태서적란황낭중.상동조작조건하장등량제혈CD34+ 세포주사도잉12.5 d태서적복강중.쾌속추침,장잉서자궁귀위병봉합복강,계속임신,등대분면.대소서출우후3개월,경미정맥취혈,재피광상태하가입조홍단백표기적항인CD45단극륭형광항체,류식세포의검측혈세포표면표기CD45적표체,통과기양성솔판단인혈액세포재소서체내적중건효과.주요관찰지표:불동이식방식대소서조혈중건적영향.결과:CD34+ 세포통과란황낭이식방식공획득건강출생소서52지,3개월후86.5%(45152)소서CIM5쟁양성표체.감합솔고체4.34%.통과복강이식방식공획득건강출생소서48지,3개월후81.3%(39/48)소서CD45정양성표체,명현저우란황낭이식방식(t=2.363,P＜0.05).결론:조기란황낭이식정이획득인조혈간세포재소서체내적장기중건,효과우우복강이식,동시야증명료통과태서란황낭이식인제혈조혈간세포취득인원화조혈계통소서모형적가행성.