军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2008年
5期
443-446,451
,共5页
曾沃坦%单永强%王晓霞%黄炜%陈小军%周骋
曾沃坦%單永彊%王曉霞%黃煒%陳小軍%週騁
증옥탄%단영강%왕효하%황위%진소군%주빙
瘦素%重组融合蛋白质类%大肠杆菌%低温%免疫活性%自诱导%表达%蛋白纯化
瘦素%重組融閤蛋白質類%大腸桿菌%低溫%免疫活性%自誘導%錶達%蛋白純化
수소%중조융합단백질류%대장간균%저온%면역활성%자유도%표체%단백순화
目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白.方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-T easy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达.用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物.对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白.用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性.结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白.Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性.结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用.
目的:建立低溫自誘導錶達重組人瘦素(leptin)融閤蛋白的繫統方法,經體外純化穫得大量具有生物活性的瘦素蛋白.方法:從cDNA文庫中擴增瘦素編碼區,剋隆到pGEM-T easy載體,測序正確後亞剋隆到A1.3錶達載體,轉入BL21(DE3),低溫自誘導錶達.用SDS-PAGE及Western印跡分析鑒定錶達產物.對低溫自誘導錶達產物rMBP-10His-Leptin進行純化和酶切,穫得可與瘦素單抗髮生特異性反應的瘦素蛋白.用Km小鼠減肥實驗檢驗其生物學活性.結果:在22×103處有明顯的新增蛋白帶,含量超過總蛋白的40%,Western印跡證實為瘦素蛋白.Km小鼠減肥實驗證實其具有生物學活性.結論:成功建立瞭低溫誘導錶達rMBP-10His-Leptin的繫統方法,穫得大量瘦素蛋白,經驗證錶達產物具有免疫活性和生物學活性,可供進一步基礎及臨床研究應用.
목적:건립저온자유도표체중조인수소(leptin)융합단백적계통방법,경체외순화획득대량구유생물활성적수소단백.방법:종cDNA문고중확증수소편마구,극륭도pGEM-T easy재체,측서정학후아극륭도A1.3표체재체,전입BL21(DE3),저온자유도표체.용SDS-PAGE급Western인적분석감정표체산물.대저온자유도표체산물rMBP-10His-Leptin진행순화화매절,획득가여수소단항발생특이성반응적수소단백.용Km소서감비실험검험기생물학활성.결과:재22×103처유명현적신증단백대,함량초과총단백적40%,Western인적증실위수소단백.Km소서감비실험증실기구유생물학활성.결론:성공건립료저온유도표체rMBP-10His-Leptin적계통방법,획득대량수소단백,경험증표체산물구유면역활성화생물학활성,가공진일보기출급림상연구응용.
