中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2008年
5期
370-373
,共4页
王芳%吴少庭%黄汉菊%李俊华%付小强%甘燕%雷蕾
王芳%吳少庭%黃漢菊%李俊華%付小彊%甘燕%雷蕾
왕방%오소정%황한국%리준화%부소강%감연%뢰뢰
弓形虫%SAG2%毕赤酵母菌%基因表达%免疫原性
弓形蟲%SAG2%畢赤酵母菌%基因錶達%免疫原性
궁형충%SAG2%필적효모균%기인표체%면역원성
目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达弓形虫SAG2基因,探索一种新的有效活化机体抗弓形虫免疫反应的疫苗.方法 以重组质粒pET23a-SAG2为模板,亚克隆目的 片段SAG2至酵母菌分泌表达载体pPICZαA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子.经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)分析.以整体重组酵母菌作为疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的免疫反应. 结果 成功构建了pPICZαA-SAG2毕赤酵母表达重组质粒.经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为22 ku的蛋白.Western blot显示,22 ku蛋白可被抗-His标签抗体识别. 结论 在毕赤酵母菌中成功表达了SAG2基因.整体重组酵母活菌具有免疫原性.
目的 在畢赤酵母(Pichia pastoris)錶達繫統中錶達弓形蟲SAG2基因,探索一種新的有效活化機體抗弓形蟲免疫反應的疫苗.方法 以重組質粒pET23a-SAG2為模闆,亞剋隆目的 片段SAG2至酵母菌分泌錶達載體pPICZαA,重組質粒經線性化後電轉化轉染至畢赤酵母菌GS115菌株,經抗生素Zeocin篩選得到高拷貝轉化子.經甲醇誘導錶達,取細胞裂解上清進行十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質印跡法(Western blot)分析.以整體重組酵母菌作為疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,檢測小鼠的免疫反應. 結果 成功構建瞭pPICZαA-SAG2畢赤酵母錶達重組質粒.經甲醇誘導,在酵母細胞內錶達分子質量單位為22 ku的蛋白.Western blot顯示,22 ku蛋白可被抗-His標籤抗體識彆. 結論 在畢赤酵母菌中成功錶達瞭SAG2基因.整體重組酵母活菌具有免疫原性.
목적 재필적효모(Pichia pastoris)표체계통중표체궁형충SAG2기인,탐색일충신적유효활화궤체항궁형충면역반응적역묘.방법 이중조질립pET23a-SAG2위모판,아극륭목적 편단SAG2지효모균분비표체재체pPICZαA,중조질립경선성화후전전화전염지필적효모균GS115균주,경항생소Zeocin사선득도고고패전화자.경갑순유도표체,취세포렬해상청진행십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화단백질인적법(Western blot)분석.이정체중조효모균작위역묘복강면역BALB/c소서,검측소서적면역반응. 결과 성공구건료pPICZαA-SAG2필적효모표체중조질립.경갑순유도,재효모세포내표체분자질량단위위22 ku적단백.Western blot현시,22 ku단백가피항-His표첨항체식별. 결론 재필적효모균중성공표체료SAG2기인.정체중조효모활균구유면역원성.
