CAJ | 학술논문

建立了疏水型色谱饼(10 mm×20 mm i.d.)与反相色谱(RPLC)离线二维色谱快速分离制备人血清蛋白质组学样品,并用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测的方法.以4种标准蛋白质的稀溶液为模型进行分离富集,得到细胞色素c(Cyt-c)与肌红蛋白(Myo)的检出限均为1 pmol/μL,溶菌酶(Lys)和胰岛素(Ins)的检出限为0.1 pmol/μL.将此方法用于人血清蛋白质组学样品的分离与制备,随着血清处理量的增大,质谱可检出的组分数目与信号强度均增加,当血清处理量达到 1.0 mL 时,可检出低丰度蛋白质或多肽285个(相对分子质量均在15 000以下).研究中将1 μg Cyt-c加入到0.5 mL血清中,用上述方法在分离富集低丰度Cyt-c上取得了很好的效果.结果表明,采用疏水型色谱饼与反相色谱联用技术不仅可对血清样品中低丰度蛋白质进行有效的分离和富集,而且一次样品的处理量大,可显著提高低丰度蛋白质的分析、检测水平.
건립료소수형색보병(10 mm×20 mm i.d.)여반상색보(RPLC)리선이유색보쾌속분리제비인혈청단백질조학양품,병용기체보조격광해흡전리비행시간질보(MALDI-TOF MS)진행검측적방법.이4충표준단백질적희용액위모형진행분리부집,득도세포색소c(Cyt-c)여기홍단백(Myo)적검출한균위1 pmol/μL,용균매(Lys)화이도소(Ins)적검출한위0.1 pmol/μL.장차방법용우인혈청단백질조학양품적분리여제비,수착혈청처리량적증대,질보가검출적조분수목여신호강도균증가,당혈청처리량체도 1.0 mL 시,가검출저봉도단백질혹다태285개(상대분자질량균재15 000이하).연구중장1 μg Cyt-c가입도0.5 mL혈청중,용상술방법재분리부집저봉도Cyt-c상취득료흔호적효과.결과표명,채용소수형색보병여반상색보련용기술불부가대혈청양품중저봉도단백질진행유효적분리화부집,이차일차양품적처리량대,가현저제고저봉도단백질적분석、검측수평.