CAJ | 학술논문

目的:观察人外周血单核细胞来源的树突状细胞转染含前列腺特异性抗原片段的重组腺相关病毒后,其所诱导的特异性T细胞对前列腺癌细胞株LNCaP和DU145的体外杀伤抑制作用.方法:实验于2006-05/10在南方医院肿瘤科生物室完成.①对象:HLA-A2基因亚型的健康自愿供血者1名,对本实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.作为靶细胞的前列腺癌细胞株LNCaP、DU145以及携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒由美国阿肯色大学生物治疗中心刘勇教授惠赠.②实验方法:抽取HLA表型为A2的健康自愿供血者外周血50 mL,Ficoll法分离单核细胞体外培养,磷酸盐缓冲液洗涤6孔板,收集悬浮细胞作为效应T细胞,贴壁细胞即为树突状细胞.向6孔板内加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒,第4天加入白细胞介素4,第6天加入肿瘤坏死因子α,至培养第7天收获悬浮细胞即为成熟的树突状细胞.③实验评估:应用流式细胞仪检测树突状细胞表面分子标记的表达.以ELISA法检测树突状细胞分泌白细胞介素12的含量.将成熟树突状细胞与效应T细胞分别按1:10、1:20、1:40进行共培养,将未经过树突状细胞共育的T细胞设置为空白对照组,ELISA法检测效应T细胞分泌干扰素γ的含量.LNCaP、DU145靶细胞分别与效应T细胞按效靶比5:1、10:1、20:1、40:1进行共培养,MTT法检测效应T细胞对两种靶细胞的杀伤作用.结果:①树突状细胞表面分子标记的表达:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒致敏后的树突状细胞,培养8 d后高表达CD83,CD40,HLA-DR,CD80,CD1a,CD86,分别为65.8%,66.0%,96.7%,70.0%,61.9%,79.0%.②树突状细胞释放白细胞介素12含量检测:与培养第1天比较,第7天成熟树突状细胞释放白细胞介素12的含量显著升高(P＜0.05).③效应T细胞释放干扰素γ含量检测:与空白对照组比较,树突状细胞:T细胞按1:10、1:20、1:40共培养后所释放的干扰素γ含量均明显升高(P＜0.01,0.01,0.05),且随树突状细胞加入比例的提高有所增加.④效应T细胞的细胞毒性作用检测:效应T细胞可有效识别并杀伤HLA-A2阳性的LNCaP细胞,其抑制作用在效靶比为10:1、20:1、40:1时均显著强于DU145细胞株(P＜0.01).结论:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒转染后的树突状细胞,其细胞表型和刺激淋巴细胞增殖、分化的功能无明显改变,可诱导自体效应T细胞增殖,该效应T细胞对LNCaP细胞具有明显杀伤作用. 目的:觀察人外週血單覈細胞來源的樹突狀細胞轉染含前列腺特異性抗原片段的重組腺相關病毒後,其所誘導的特異性T細胞對前列腺癌細胞株LNCaP和DU145的體外殺傷抑製作用.方法:實驗于2006-05/10在南方醫院腫瘤科生物室完成.①對象:HLA-A2基因亞型的健康自願供血者1名,對本實驗知情同意,實驗經醫院醫學倫理委員會批準.作為靶細胞的前列腺癌細胞株LNCaP、DU145以及攜帶前列腺特異性抗原基因的重組腺相關病毒由美國阿肯色大學生物治療中心劉勇教授惠贈.②實驗方法:抽取HLA錶型為A2的健康自願供血者外週血50 mL,Ficoll法分離單覈細胞體外培養,燐痠鹽緩遲液洗滌6孔闆,收集懸浮細胞作為效應T細胞,貼壁細胞即為樹突狀細胞.嚮6孔闆內加入粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子和攜帶前列腺特異性抗原基因的重組腺相關病毒,第4天加入白細胞介素4,第6天加入腫瘤壞死因子α,至培養第7天收穫懸浮細胞即為成熟的樹突狀細胞.③實驗評估:應用流式細胞儀檢測樹突狀細胞錶麵分子標記的錶達.以ELISA法檢測樹突狀細胞分泌白細胞介素12的含量.將成熟樹突狀細胞與效應T細胞分彆按1:10、1:20、1:40進行共培養,將未經過樹突狀細胞共育的T細胞設置為空白對照組,ELISA法檢測效應T細胞分泌榦擾素γ的含量.LNCaP、DU145靶細胞分彆與效應T細胞按效靶比5:1、10:1、20:1、40:1進行共培養,MTT法檢測效應T細胞對兩種靶細胞的殺傷作用.結果:①樹突狀細胞錶麵分子標記的錶達:經攜帶前列腺特異性抗原基因的重組腺相關病毒緻敏後的樹突狀細胞,培養8 d後高錶達CD83,CD40,HLA-DR,CD80,CD1a,CD86,分彆為65.8%,66.0%,96.7%,70.0%,61.9%,79.0%.②樹突狀細胞釋放白細胞介素12含量檢測:與培養第1天比較,第7天成熟樹突狀細胞釋放白細胞介素12的含量顯著升高(P＜0.05).③效應T細胞釋放榦擾素γ含量檢測:與空白對照組比較,樹突狀細胞:T細胞按1:10、1:20、1:40共培養後所釋放的榦擾素γ含量均明顯升高(P＜0.01,0.01,0.05),且隨樹突狀細胞加入比例的提高有所增加.④效應T細胞的細胞毒性作用檢測:效應T細胞可有效識彆併殺傷HLA-A2暘性的LNCaP細胞,其抑製作用在效靶比為10:1、20:1、40:1時均顯著彊于DU145細胞株(P＜0.01).結論:經攜帶前列腺特異性抗原基因的重組腺相關病毒轉染後的樹突狀細胞,其細胞錶型和刺激淋巴細胞增殖、分化的功能無明顯改變,可誘導自體效應T細胞增殖,該效應T細胞對LNCaP細胞具有明顯殺傷作用.
목적:관찰인외주혈단핵세포래원적수돌상세포전염함전렬선특이성항원편단적중조선상관병독후,기소유도적특이성T세포대전렬선암세포주LNCaP화DU145적체외살상억제작용.방법:실험우2006-05/10재남방의원종류과생물실완성.①대상:HLA-A2기인아형적건강자원공혈자1명,대본실험지정동의,실험경의원의학윤리위원회비준.작위파세포적전렬선암세포주LNCaP、DU145이급휴대전렬선특이성항원기인적중조선상관병독유미국아긍색대학생물치료중심류용교수혜증.②실험방법:추취HLA표형위A2적건강자원공혈자외주혈50 mL,Ficoll법분리단핵세포체외배양,린산염완충액세조6공판,수집현부세포작위효응T세포,첩벽세포즉위수돌상세포.향6공판내가입립세포-거서세포집락자격인자화휴대전렬선특이성항원기인적중조선상관병독,제4천가입백세포개소4,제6천가입종류배사인자α,지배양제7천수획현부세포즉위성숙적수돌상세포.③실험평고:응용류식세포의검측수돌상세포표면분자표기적표체.이ELISA법검측수돌상세포분비백세포개소12적함량.장성숙수돌상세포여효응T세포분별안1:10、1:20、1:40진행공배양,장미경과수돌상세포공육적T세포설치위공백대조조,ELISA법검측효응T세포분비간우소γ적함량.LNCaP、DU145파세포분별여효응T세포안효파비5:1、10:1、20:1、40:1진행공배양,MTT법검측효응T세포대량충파세포적살상작용.결과:①수돌상세포표면분자표기적표체:경휴대전렬선특이성항원기인적중조선상관병독치민후적수돌상세포,배양8 d후고표체CD83,CD40,HLA-DR,CD80,CD1a,CD86,분별위65.8%,66.0%,96.7%,70.0%,61.9%,79.0%.②수돌상세포석방백세포개소12함량검측:여배양제1천비교,제7천성숙수돌상세포석방백세포개소12적함량현저승고(P＜0.05).③효응T세포석방간우소γ함량검측:여공백대조조비교,수돌상세포:T세포안1:10、1:20、1:40공배양후소석방적간우소γ함량균명현승고(P＜0.01,0.01,0.05),차수수돌상세포가입비례적제고유소증가.④효응T세포적세포독성작용검측:효응T세포가유효식별병살상HLA-A2양성적LNCaP세포,기억제작용재효파비위10:1、20:1、40:1시균현저강우DU145세포주(P＜0.01).결론:경휴대전렬선특이성항원기인적중조선상관병독전염후적수돌상세포,기세포표형화자격림파세포증식、분화적공능무명현개변,가유도자체효응T세포증식,해효응T세포대LNCaP세포구유명현살상작용.