实用预防医学
實用預防醫學
실용예방의학
PRACTICAL PREVENTIVE MEDICINE
2007年
6期
1678-1682
,共5页
张连英%何汉江%尹卫国%汪文玉%占利生%谭立志
張連英%何漢江%尹衛國%汪文玉%佔利生%譚立誌
장련영%하한강%윤위국%왕문옥%점리생%담립지
钩端螺旋体%外膜蛋白%表达%免疫保护
鉤耑螺鏇體%外膜蛋白%錶達%免疫保護
구단라선체%외막단백%표체%면역보호
目的 构建问号状钩体强毒赖型56601株外膜蛋白Loa22的重组质粒,表达Loa22蛋白,研究该蛋白对豚鼠的保护作用.方法 以问号状赖型钩体56601株基因组为模板扩增目的 基因,将Loa22基因克隆至原核表达载体PQE-31,构建PQE31-Loa22重组体,将其转入大肠杆菌M15中诱导表达目的 蛋白.于0、2、4周将蛋白及对照PBS分别经豚鼠腹股沟、腋下免疫豚鼠.每次剂量为蛋白50 μg/只,末次免疫后2周,用培养3 d的56601株钩体从腹腔攻击各免疫组豚鼠(1 ml/只).连续观察15 d,观察各免疫组豚鼠发病情况,并取各免疫组豚鼠的肺、肝、肾做病理切片.分析蛋白Loa22对豚鼠的免疫保护作用.结果 成功扩增出Loa22基因,构建原核重组质粒PQE31-Loa22.重组质粒能在大肠杆菌M15中高效表达Loa22蛋白.用Loa22蛋白主动免疫的豚鼠用56601株钩体攻击,结果显示无发病现象,而免疫对照组的豚鼠中出现了食欲不振、活动减少等现象,病理切片有明显改变.结论 成功构建了Loa22重组原核表达质粒,表达纯化的蛋白可以使豚鼠抵抗同型钩体的攻击,免疫保护作用为82%.
目的 構建問號狀鉤體彊毒賴型56601株外膜蛋白Loa22的重組質粒,錶達Loa22蛋白,研究該蛋白對豚鼠的保護作用.方法 以問號狀賴型鉤體56601株基因組為模闆擴增目的 基因,將Loa22基因剋隆至原覈錶達載體PQE-31,構建PQE31-Loa22重組體,將其轉入大腸桿菌M15中誘導錶達目的 蛋白.于0、2、4週將蛋白及對照PBS分彆經豚鼠腹股溝、腋下免疫豚鼠.每次劑量為蛋白50 μg/隻,末次免疫後2週,用培養3 d的56601株鉤體從腹腔攻擊各免疫組豚鼠(1 ml/隻).連續觀察15 d,觀察各免疫組豚鼠髮病情況,併取各免疫組豚鼠的肺、肝、腎做病理切片.分析蛋白Loa22對豚鼠的免疫保護作用.結果 成功擴增齣Loa22基因,構建原覈重組質粒PQE31-Loa22.重組質粒能在大腸桿菌M15中高效錶達Loa22蛋白.用Loa22蛋白主動免疫的豚鼠用56601株鉤體攻擊,結果顯示無髮病現象,而免疫對照組的豚鼠中齣現瞭食欲不振、活動減少等現象,病理切片有明顯改變.結論 成功構建瞭Loa22重組原覈錶達質粒,錶達純化的蛋白可以使豚鼠牴抗同型鉤體的攻擊,免疫保護作用為82%.
목적 구건문호상구체강독뢰형56601주외막단백Loa22적중조질립,표체Loa22단백,연구해단백대돈서적보호작용.방법 이문호상뢰형구체56601주기인조위모판확증목적 기인,장Loa22기인극륭지원핵표체재체PQE-31,구건PQE31-Loa22중조체,장기전입대장간균M15중유도표체목적 단백.우0、2、4주장단백급대조PBS분별경돈서복고구、액하면역돈서.매차제량위단백50 μg/지,말차면역후2주,용배양3 d적56601주구체종복강공격각면역조돈서(1 ml/지).련속관찰15 d,관찰각면역조돈서발병정황,병취각면역조돈서적폐、간、신주병리절편.분석단백Loa22대돈서적면역보호작용.결과 성공확증출Loa22기인,구건원핵중조질립PQE31-Loa22.중조질립능재대장간균M15중고효표체Loa22단백.용Loa22단백주동면역적돈서용56601주구체공격,결과현시무발병현상,이면역대조조적돈서중출현료식욕불진、활동감소등현상,병리절편유명현개변.결론 성공구건료Loa22중조원핵표체질립,표체순화적단백가이사돈서저항동형구체적공격,면역보호작용위82%.
