分子细胞生物学报
分子細胞生物學報
분자세포생물학보
JOURNAL OF MOLECULAR CELL BIOLOGY
2007年
5期
286-294
,共9页
大豆%根癌农杆菌%转化%子叶节
大豆%根癌農桿菌%轉化%子葉節
대두%근암농간균%전화%자협절
利用携带pCAMBIA1301质粒(含hpt和gus基因)的超毒根癌农杆菌菌株EHA105对大豆子叶节外植体进行遗传转化,研究了影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素.研究结果表明,农杆菌侵染液和共培养培养基中添加200μmol/L乙酰丁香酮和50mg/L抗坏血酸可以有效促进农杆菌对大豆子叶节的转化.农杆菌与子叶节共培养后羧苄青霉素(250 mg/L)和头孢霉素(100 mg/L)结合使用能有效抑制农杆菌过度繁殖并提高转化芽诱导频率;在转化细胞的分化和转化芽伸长过程中,改进的筛选策略可以明显改善对转化芽的筛选效果,从而提高转化频率.应用优化后的转化体系,获得了3个国内大豆主栽品种的转基因植株,PCR阳性植株频率为3.8%-7.6%.转化植株叶片总DNA的PCR和Southern blot实验表明,T-DNA上的外源基因已经整合到大豆基因组中.
利用攜帶pCAMBIA1301質粒(含hpt和gus基因)的超毒根癌農桿菌菌株EHA105對大豆子葉節外植體進行遺傳轉化,研究瞭影響農桿菌介導的大豆子葉節遺傳轉化的因素.研究結果錶明,農桿菌侵染液和共培養培養基中添加200μmol/L乙酰丁香酮和50mg/L抗壞血痠可以有效促進農桿菌對大豆子葉節的轉化.農桿菌與子葉節共培養後羧芐青黴素(250 mg/L)和頭孢黴素(100 mg/L)結閤使用能有效抑製農桿菌過度繁殖併提高轉化芽誘導頻率;在轉化細胞的分化和轉化芽伸長過程中,改進的篩選策略可以明顯改善對轉化芽的篩選效果,從而提高轉化頻率.應用優化後的轉化體繫,穫得瞭3箇國內大豆主栽品種的轉基因植株,PCR暘性植株頻率為3.8%-7.6%.轉化植株葉片總DNA的PCR和Southern blot實驗錶明,T-DNA上的外源基因已經整閤到大豆基因組中.
이용휴대pCAMBIA1301질립(함hpt화gus기인)적초독근암농간균균주EHA105대대두자협절외식체진행유전전화,연구료영향농간균개도적대두자협절유전전화적인소.연구결과표명,농간균침염액화공배양배양기중첨가200μmol/L을선정향동화50mg/L항배혈산가이유효촉진농간균대대두자협절적전화.농간균여자협절공배양후최변청매소(250 mg/L)화두포매소(100 mg/L)결합사용능유효억제농간균과도번식병제고전화아유도빈솔;재전화세포적분화화전화아신장과정중,개진적사선책략가이명현개선대전화아적사선효과,종이제고전화빈솔.응용우화후적전화체계,획득료3개국내대두주재품충적전기인식주,PCR양성식주빈솔위3.8%-7.6%.전화식주협편총DNA적PCR화Southern blot실험표명,T-DNA상적외원기인이경정합도대두기인조중.
