饲料工业
飼料工業
사료공업
FEED INDUSTRY
2007年
24期
18-22
,共5页
权志中%张丞斌%余荣%刘长江
權誌中%張丞斌%餘榮%劉長江
권지중%장승빈%여영%류장강
溶菌酶%克隆%表达%毕赤酵母
溶菌酶%剋隆%錶達%畢赤酵母
용균매%극륭%표체%필적효모
研究从鸡输卵管组织提取细胞总RNA,根据Gene Bank中已发表的鸡溶茵酶基因序列,设计合成特异引物,合成cDNA序列,并以此为模版,PCR扩增鸡溶菌酶基因.用Xho I和Xba I对LYZ基因的PCR产物和真核表达载体pPIC6αA进行双酶切后转化到大肠杆菌(DH5α)中,构建成为真核重组表达载体pPIC6αA-LYZ.该载体经PstX I酶切线性化后,以电击转化方法导入到毕赤酵母宿主菌x-33中,经Blasticidin抗性筛选,得到鸡溶菌酶基因重组毕赤酵母菌株;甲醇96 h(发酵罐诱导 100 h)诱导表达,经Wetern-blot检测分析,基因重组工程菌株摇瓶诱导表达溶茵酶的表达量约为4 rag/1,发酵罐诱导表达的表达量约为10 mg/1.
研究從鷄輸卵管組織提取細胞總RNA,根據Gene Bank中已髮錶的鷄溶茵酶基因序列,設計閤成特異引物,閤成cDNA序列,併以此為模版,PCR擴增鷄溶菌酶基因.用Xho I和Xba I對LYZ基因的PCR產物和真覈錶達載體pPIC6αA進行雙酶切後轉化到大腸桿菌(DH5α)中,構建成為真覈重組錶達載體pPIC6αA-LYZ.該載體經PstX I酶切線性化後,以電擊轉化方法導入到畢赤酵母宿主菌x-33中,經Blasticidin抗性篩選,得到鷄溶菌酶基因重組畢赤酵母菌株;甲醇96 h(髮酵罐誘導 100 h)誘導錶達,經Wetern-blot檢測分析,基因重組工程菌株搖瓶誘導錶達溶茵酶的錶達量約為4 rag/1,髮酵罐誘導錶達的錶達量約為10 mg/1.
연구종계수란관조직제취세포총RNA,근거Gene Bank중이발표적계용인매기인서렬,설계합성특이인물,합성cDNA서렬,병이차위모판,PCR확증계용균매기인.용Xho I화Xba I대LYZ기인적PCR산물화진핵표체재체pPIC6αA진행쌍매절후전화도대장간균(DH5α)중,구건성위진핵중조표체재체pPIC6αA-LYZ.해재체경PstX I매절선성화후,이전격전화방법도입도필적효모숙주균x-33중,경Blasticidin항성사선,득도계용균매기인중조필적효모균주;갑순96 h(발효관유도 100 h)유도표체,경Wetern-blot검측분석,기인중조공정균주요병유도표체용인매적표체량약위4 rag/1,발효관유도표체적표체량약위10 mg/1.
