EBI3蛋白基因克隆、表达及其初步鉴定
EBI3단백기인극륭、표체급기초보감정
Cloning, expression and identification of EBI3
  • 万方数据
    安徽医科大学学报 안휘의과대학학보
    ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
    2010年 1期 1-5 ,共5页

    廖法学%彭丽娜%张平平%杨帆%刘慧敏%陈伟%梁坤%张玉侠%沈际佳

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    基因表达 基因錶達
    기인표체
    目的 进一步研究EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白在病原生物感染宿主中的功能,探讨原核表达小鼠EBI3蛋白并初步鉴定.方法 收集日本血吸虫感染的C57/BL6小鼠脾细胞后提取总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得EBI3的cDNA,将该基因亚克隆入原核表达载体pET32a(+) ,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21株, 经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对包涵体进行变性、纯化和复性后获得可溶性的小鼠重组EBI3蛋白,用Western blot对其鉴定.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠获取血清,经饱和硫酸铵法和DEAE-Sephadex A-50柱纯化得到抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA检测其免疫活性.结果 基因工程获得目的 蛋白变性复性成功后经Western blot鉴定证实为小鼠重组EBI3蛋白,免疫小鼠后取血清,分离纯化获得抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA结果表明该蛋白具有免疫原性.结论 成功地表达了小鼠重组EBI3蛋白,并制备了抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,为进一步研究EBI3蛋白在病原生物感染宿主中的功能奠定了基础.
    목적 진일보연구EB병독유도기인3(EBI3)단백재병원생물감염숙주중적공능,탐토원핵표체소서EBI3단백병초보감정.방법 수집일본혈흡충감염적C57/BL6소서비세포후제취총RNA,이용소합성인물경RT-PCR획득EBI3적cDNA,장해기인아극륭입원핵표체재체pET32a(+) ,전화지대장애희균(E.coli)BL21주, 경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,대포함체진행변성、순화화복성후획득가용성적소서중조EBI3단백,용Western blot대기감정.용순화적중조단백면역BALB/c소서획취혈청,경포화류산안법화DEAE-Sephadex A-50주순화득도항소서중조EBI3단백다극륭항체,ELISA검측기면역활성.결과 기인공정획득목적 단백변성복성성공후경Western blot감정증실위소서중조EBI3단백,면역소서후취혈청,분리순화획득항소서중조EBI3단백다극륭항체,ELISA결과표명해단백구유면역원성.결론 성공지표체료소서중조EBI3단백,병제비료항소서중조EBI3단백다극륭항체,위진일보연구EBI3단백재병원생물감염숙주중적공능전정료기출.
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