中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2007年
11期
856-860,895
,共6页
陈建飞%冯力%时洪艳%孙东波%白兴华%佟有恩
陳建飛%馮力%時洪豔%孫東波%白興華%佟有恩
진건비%풍력%시홍염%손동파%백흥화%동유은
猪流行性腹泻病毒%N蛋白基因%序列同源性%重组蛋白%免疫学活性
豬流行性腹瀉病毒%N蛋白基因%序列同源性%重組蛋白%免疫學活性
저류행성복사병독%N단백기인%서렬동원성%중조단백%면역학활성
应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析.CH/S株N蛋白基因含有一个长1 326 bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失.CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03 N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%.以阳性质粒为模板,用分别含有BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4 Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性.
應用RT-PCR和nested-PCR方法擴增得到含豬流行性腹瀉病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,併將其進行瞭剋隆、序列測定及分析.CH/S株N蛋白基因含有一箇長1 326 bp的ORF,編碼由441箇氨基痠殘基組成的多肽,未髮現堿基的插入和缺失.CH/S與CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03 N蛋白基因ORF的序列同源性分彆為97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推導的氨基痠序列的同源性分彆為97.7%、97.1%、97.1%和96.8%.以暘性質粒為模闆,用分彆含有BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位點的上、下遊引物擴增得到ORF,其PCR產物經BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切後定嚮剋隆到pET-30a載體,構建的重組質粒命名為pET-30a-PN;將pET-30a-PN轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中,在IPTG誘導下進行錶達;SDS-PAGE結果錶明錶達齣與預期大小相符的約54.4 Ku的重組蛋白,重組蛋白以包涵體形式存在;薄層掃描結果錶明錶達產物佔菌體總蛋白的30.5%;Western blot分析錶明錶達的重組蛋白能與抗PEDV高免血清反應,說明該重組蛋白具有免疫學活性.
응용RT-PCR화nested-PCR방법확증득도함저류행성복사병독CH/S주N단백기인적목적편단,병장기진행료극륭、서렬측정급분석.CH/S주N단백기인함유일개장1 326 bp적ORF,편마유441개안기산잔기조성적다태,미발현감기적삽입화결실.CH/S여CV777、Chinju99、JS-2004-2화LJB/03 N단백기인ORF적서렬동원성분별위97.1%、96.8%、96.7%화96.5%;추도적안기산서렬적동원성분별위97.7%、97.1%、97.1%화96.8%.이양성질립위모판,용분별함유BamH Ⅰ화Xho Ⅰ매절위점적상、하유인물확증득도ORF,기PCR산물경BamH Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절후정향극륭도pET-30a재체,구건적중조질립명명위pET-30a-PN;장pET-30a-PN전화도대장간균BL21(DE3)중,재IPTG유도하진행표체;SDS-PAGE결과표명표체출여예기대소상부적약54.4 Ku적중조단백,중조단백이포함체형식존재;박층소묘결과표명표체산물점균체총단백적30.5%;Western blot분석표명표체적중조단백능여항PEDV고면혈청반응,설명해중조단백구유면역학활성.
