CAJ | 학술논문

目的:目前多采用胎牛血清培养骨髓间充质干细胞,实验应用自体血清培养骨髓间充质干细胞并诱导其向神细胞分化,拟验证其可行性及并分析其可能的机制.方法:实验于2005-10/2006-08在同济医学院附属同济医院神经外科实验室完成.培养骨髓间充质干细胞所用骨髓来源为本院需行骨髓穿刺的健康成人(共3例,年龄26-44岁),本人及家属知情同意.梯度离心法分离成人骨髓间充质干细胞,并利用自体血清进行体外培养扩增.主要观察指标:采用相差显微镜观察细胞形态变化;透射电镜观察骨髓间充质干细胞的超微结构;流式细胞术鉴定细胞表面标记物;3-5代细胞利用生长因子和N2添加剂进行诱导分化,采用RT-PCR检测Netin和神经元特异性烯醇化酶mRNA在诱导前后的表达.结果:①细胞形态变化:利用自体血清培养的骨髓间充质干细胞主要呈长或宽扁的梭形,在体外传代扩增速度较快.②超微结构:电镜下细胞表面可见细胞核较大,不规则,核质比较小,胞质中有丰富的细胞器,可见缝隙连接.③细胞表面标记物鉴定:多数细胞为CD44、CD105阳性,CD34、CD45阴性.④Netin和神经元特异性烯醇化酶mRNA的表达:诱导后部分细胞呈神经元样改变,Nestin mRNA表达水平于3 d达高峰,随后减少,神经元特异性烯醇化酶mRNA于5-7 d达高峰,并可持续数日.结论:应用自体血清可成功培养骨髓间充质干细胞,并在体外条件下定向诱导分化为神经元样细胞.
목적:목전다채용태우혈청배양골수간충질간세포,실험응용자체혈청배양골수간충질간세포병유도기향신세포분화,의험증기가행성급병분석기가능적궤제.방법:실험우2005-10/2006-08재동제의학원부속동제의원신경외과실험실완성.배양골수간충질간세포소용골수래원위본원수행골수천자적건강성인(공3례,년령26-44세),본인급가속지정동의.제도리심법분리성인골수간충질간세포,병이용자체혈청진행체외배양확증.주요관찰지표:채용상차현미경관찰세포형태변화;투사전경관찰골수간충질간세포적초미결구;류식세포술감정세포표면표기물;3-5대세포이용생장인자화N2첨가제진행유도분화,채용RT-PCR검측Netin화신경원특이성희순화매mRNA재유도전후적표체.결과:①세포형태변화:이용자체혈청배양적골수간충질간세포주요정장혹관편적사형,재체외전대확증속도교쾌.②초미결구:전경하세포표면가견세포핵교대,불규칙,핵질비교소,포질중유봉부적세포기,가견봉극련접.③세포표면표기물감정:다수세포위CD44、CD105양성,CD34、CD45음성.④Netin화신경원특이성희순화매mRNA적표체:유도후부분세포정신경원양개변,Nestin mRNA표체수평우3 d체고봉,수후감소,신경원특이성희순화매mRNA우5-7 d체고봉,병가지속수일.결론:응용자체혈청가성공배양골수간충질간세포,병재체외조건하정향유도분화위신경원양세포.