中国公共卫生
中國公共衛生
중국공공위생
CHINA PUBLIC HEALTH
2007年
8期
976-977
,共2页
赵鸿梅%滕秋艳%张哲%于秉治
趙鴻梅%滕鞦豔%張哲%于秉治
조홍매%등추염%장철%우병치
Cdc25B%基因表达%谷胱甘肽转移酶(GST)%聚合酶链式反应
Cdc25B%基因錶達%穀胱甘肽轉移酶(GST)%聚閤酶鏈式反應
Cdc25B%기인표체%곡광감태전이매(GST)%취합매련식반응
目的 研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达.方法 应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5'及3'端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达载体PGEX4T-2,构建成PGEX4T-2-Cdc25B融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21后,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导进行目的蛋白表达.结果 通过双酶切、电泳分析及测序证明成功构建了Cdc25B融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹(Western blot)显示,相对分子量为53KD的蛋白谱带,与预期一致.结论 成功构建并表达了Cdc25B-N末端缺失的基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为近一步研究Cdc25B的功能提供基础依据.
目的 研究小鼠N末耑缺失286氨基痠的野生型Cdc25B原覈錶達載體的構建和錶達.方法 應用Primer5.0軟件分析併設計小鼠Cdc25B5'及3'耑引物(N末耑缺失286氨基酶),化學閤成併用聚閤酶鏈反就(PCR)方法擴增,經限製性內切酶酶切後連接原覈錶達載體PGEX4T-2,構建成PGEX4T-2-Cdc25B融閤錶達載體,轉化大腸埃希菌BL21後,通過異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導進行目的蛋白錶達.結果 通過雙酶切、電泳分析及測序證明成功構建瞭Cdc25B融閤錶達載體,融閤蛋白產物經蛋白印跡(Western blot)顯示,相對分子量為53KD的蛋白譜帶,與預期一緻.結論 成功構建併錶達瞭Cdc25B-N末耑缺失的基因,併在原覈細胞中穫得較高水平的錶達,為近一步研究Cdc25B的功能提供基礎依據.
목적 연구소서N말단결실286안기산적야생형Cdc25B원핵표체재체적구건화표체.방법 응용Primer5.0연건분석병설계소서Cdc25B5'급3'단인물(N말단결실286안기매),화학합성병용취합매련반취(PCR)방법확증,경한제성내절매매절후련접원핵표체재체PGEX4T-2,구건성PGEX4T-2-Cdc25B융합표체재체,전화대장애희균BL21후,통과이병기류대-β-D반유당감(IPTG)유도진행목적단백표체.결과 통과쌍매절、전영분석급측서증명성공구건료Cdc25B융합표체재체,융합단백산물경단백인적(Western blot)현시,상대분자량위53KD적단백보대,여예기일치.결론 성공구건병표체료Cdc25B-N말단결실적기인,병재원핵세포중획득교고수평적표체,위근일보연구Cdc25B적공능제공기출의거.
