郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2007年
4期
620-623
,共4页
何群力%苗立群%赵国新%孙翔%王永玲%张明智
何群力%苗立群%趙國新%孫翔%王永玲%張明智
하군력%묘립군%조국신%손상%왕영령%장명지
Livin%真核表达载体%凋亡抑制蛋白
Livin%真覈錶達載體%凋亡抑製蛋白
Livin%진핵표체재체%조망억제단백
目的:构建凋亡抑制蛋白Livin真核表达载体pIRES2-AcGFP-Livin.方法:设计合成扩增Livinα和Livinβ基因全长cDNA序列的特异性PCR引物,以食管鳞状细胞癌EC9706细胞总RNA为模板,进行RT-PCR,将获得的cDNA序列克隆入T载体,再用BglⅡ和EcoRⅠ双酶切,亚克隆入真核表达载体pIRES2-AcGFP,将重组质粒用脂质体包裹转染NIH3T3细胞,G418筛选得到稳定表达的细胞克隆,Western-blot检测转染细胞Livinα和Livinβ蛋白的表达情况.结果:构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP-Livinα和pIRES2-AcGFP-Livinβ,测序分析证实插入序列正确;转染的NIH3T3细胞,可稳定表达Livinα或Livinβ蛋白.结论:成功构建Livinα和Livinβ真核表达载体.
目的:構建凋亡抑製蛋白Livin真覈錶達載體pIRES2-AcGFP-Livin.方法:設計閤成擴增Livinα和Livinβ基因全長cDNA序列的特異性PCR引物,以食管鱗狀細胞癌EC9706細胞總RNA為模闆,進行RT-PCR,將穫得的cDNA序列剋隆入T載體,再用BglⅡ和EcoRⅠ雙酶切,亞剋隆入真覈錶達載體pIRES2-AcGFP,將重組質粒用脂質體包裹轉染NIH3T3細胞,G418篩選得到穩定錶達的細胞剋隆,Western-blot檢測轉染細胞Livinα和Livinβ蛋白的錶達情況.結果:構建瞭真覈錶達載體pIRES2-AcGFP-Livinα和pIRES2-AcGFP-Livinβ,測序分析證實插入序列正確;轉染的NIH3T3細胞,可穩定錶達Livinα或Livinβ蛋白.結論:成功構建Livinα和Livinβ真覈錶達載體.
목적:구건조망억제단백Livin진핵표체재체pIRES2-AcGFP-Livin.방법:설계합성확증Livinα화Livinβ기인전장cDNA서렬적특이성PCR인물,이식관린상세포암EC9706세포총RNA위모판,진행RT-PCR,장획득적cDNA서렬극륭입T재체,재용BglⅡ화EcoRⅠ쌍매절,아극륭입진핵표체재체pIRES2-AcGFP,장중조질립용지질체포과전염NIH3T3세포,G418사선득도은정표체적세포극륭,Western-blot검측전염세포Livinα화Livinβ단백적표체정황.결과:구건료진핵표체재체pIRES2-AcGFP-Livinα화pIRES2-AcGFP-Livinβ,측서분석증실삽입서렬정학;전염적NIH3T3세포,가은정표체Livinα혹Livinβ단백.결론:성공구건Livinα화Livinβ진핵표체재체.
