南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2007年
7期
955-958
,共4页
叶海燕%郭爱林%张萌%吕国丽%文剑明
葉海燕%郭愛林%張萌%呂國麗%文劍明
협해연%곽애림%장맹%려국려%문검명
蛋白酪氨酸磷酸酯酶%真核表达载体%肝细胞%侵袭
蛋白酪氨痠燐痠酯酶%真覈錶達載體%肝細胞%侵襲
단백락안산린산지매%진핵표체재체%간세포%침습
目的 构建PRL-2真核表达载体并观察其致侵袭和粘附的能力.方法 用RT-PCR法从肝癌细胞系HepG2总RNA中扩增编码PRL-2基因全长阅读开放框DNA,构建真核表达载体.以脂质体转染法将重组质粒稳定转染至正常永生化肝细胞系CL1中,筛选阳性克隆.分别应用RT-PCR、Western blotting免疫印迹和免疫组化法分析PRL-2在阳性细胞中mRNA、蛋白表达及其定位.MTT法观察转染20 min和120 min后与底物粘附的细胞数,评价PRL-2对CL1肝细胞粘附能力的促进作用,观察6 h后细胞穿透多聚碳膜上层粘蛋白的细胞数,分析PRL-2对肝细胞浸润迁移的影响.结果 经RT-PCR扩增出大小为504 bp的基因片断,序列测定正确并经亚克隆酶切鉴定.经过8周G418筛选后,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1,经RT-PCR、Western blotting印迹和免疫组化证实,PRL-2-CL1细胞系表达PRL-2 mRNA及蛋白.PRL-2使CL-1细胞在20 min和120 min时对纤连蛋白的粘附率明显升高(P＜0.05),PRL-2使CL-1细胞穿透迁移小室多聚碳膜的细胞数由(10.0±3.7)个显著升高至(44.8±2.6)个(P＜0.05).结论 成功构建重组PRL-2真核表达载体并可在永生化肝细胞中稳定表达,PRL-2具有致肝癌细胞侵袭和转移的能力.
目的 構建PRL-2真覈錶達載體併觀察其緻侵襲和粘附的能力.方法 用RT-PCR法從肝癌細胞繫HepG2總RNA中擴增編碼PRL-2基因全長閱讀開放框DNA,構建真覈錶達載體.以脂質體轉染法將重組質粒穩定轉染至正常永生化肝細胞繫CL1中,篩選暘性剋隆.分彆應用RT-PCR、Western blotting免疫印跡和免疫組化法分析PRL-2在暘性細胞中mRNA、蛋白錶達及其定位.MTT法觀察轉染20 min和120 min後與底物粘附的細胞數,評價PRL-2對CL1肝細胞粘附能力的促進作用,觀察6 h後細胞穿透多聚碳膜上層粘蛋白的細胞數,分析PRL-2對肝細胞浸潤遷移的影響.結果 經RT-PCR擴增齣大小為504 bp的基因片斷,序列測定正確併經亞剋隆酶切鑒定.經過8週G418篩選後,穫得穩定錶達PRL-2的細胞亞繫PRL-2-CL1,經RT-PCR、Western blotting印跡和免疫組化證實,PRL-2-CL1細胞繫錶達PRL-2 mRNA及蛋白.PRL-2使CL-1細胞在20 min和120 min時對纖連蛋白的粘附率明顯升高(P＜0.05),PRL-2使CL-1細胞穿透遷移小室多聚碳膜的細胞數由(10.0±3.7)箇顯著升高至(44.8±2.6)箇(P＜0.05).結論 成功構建重組PRL-2真覈錶達載體併可在永生化肝細胞中穩定錶達,PRL-2具有緻肝癌細胞侵襲和轉移的能力.
목적 구건PRL-2진핵표체재체병관찰기치침습화점부적능력.방법 용RT-PCR법종간암세포계HepG2총RNA중확증편마PRL-2기인전장열독개방광DNA,구건진핵표체재체.이지질체전염법장중조질립은정전염지정상영생화간세포계CL1중,사선양성극륭.분별응용RT-PCR、Western blotting면역인적화면역조화법분석PRL-2재양성세포중mRNA、단백표체급기정위.MTT법관찰전염20 min화120 min후여저물점부적세포수,평개PRL-2대CL1간세포점부능력적촉진작용,관찰6 h후세포천투다취탄막상층점단백적세포수,분석PRL-2대간세포침윤천이적영향.결과 경RT-PCR확증출대소위504 bp적기인편단,서렬측정정학병경아극륭매절감정.경과8주G418사선후,획득은정표체PRL-2적세포아계PRL-2-CL1,경RT-PCR、Western blotting인적화면역조화증실,PRL-2-CL1세포계표체PRL-2 mRNA급단백.PRL-2사CL-1세포재20 min화120 min시대섬련단백적점부솔명현승고(P＜0.05),PRL-2사CL-1세포천투천이소실다취탄막적세포수유(10.0±3.7)개현저승고지(44.8±2.6)개(P＜0.05).결론 성공구건중조PRL-2진핵표체재체병가재영생화간세포중은정표체,PRL-2구유치간암세포침습화전이적능력.
